[發明專利]坐骨神經結扎皮下荷瘤大鼠模型及其在用于篩選鎮痛抗腫瘤藥物中的應用

在審

• 申請號: 201510833237.2
• 申請日: 2015-11-25
• 公開（公告）號: CN105457043A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發明（設計）人: 丁罡;姜峰;葉品;胡薇薇;李靜
• 申請（專利權）人: 上海市崇明新華癌痛轉化研究所
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A01K67/02
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 劉曉

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及坐骨神經結扎皮下荷瘤大鼠模型及其在用于篩選鎮痛抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

臨床研究表明，大約有20%-50%的癌癥患者受疼痛困擾，超過75%-90%的晚期癌癥病人伴有嚴重的疼痛癥狀。癌性疼痛的存在，已經成為繼炎性疼痛和神經病理性疼痛之后又一困擾人類的頑固性慢性疼痛，劇烈的疼痛可導致失眠、抑郁、虛弱、厭食等癥狀群，嚴重影響了患者的生活質量。越來越多的臨床研究提示，無論從癌性痛本身，還是從其作為腫瘤的一種并發癥狀來講，癌性疼痛都應作為一種嚴重威脅患者生存質量、甚至生存期的疾病來看待。DanH等人通過對158例晚期腫瘤患者的調查分析發現，疼痛與上述癥狀之間呈現較高的正相關性。麻省總醫院的研究人員發現，較早接受以抗痛治療為主的姑息治療方案的晚期非小細胞肺癌患者，其中位生存期（11.6月）比接受常規治療的患者（8.9月）顯著延長。在接受化學治療的晚期非小細胞肺癌患者中，也觀察到類似的現象：在化療方案和劑量相同的情況下，抗痛姑息治療組的有效生存時間顯著高于常規治療組。此外，JohnM等人通過一項6,565名志愿者參與的基于人群隊列的前瞻性研究發現，疼痛(Widespreadbodypain)不僅可增加罹患癌癥的風險，還可顯著減少癌癥患者的生存期。由此可見，癌性疼痛對病人的影響是廣泛的，不僅腫瘤的持續進展可以加劇癌性疼痛，持續存在的癌痛也會進一步促進腫瘤進程。有效的控制癌性疼痛，是對腫瘤治療的重要補充，能夠為患者贏得更好的生活質量和更長的生存期。

因此，通過設計高效特異性鎮痛藥物實現對中晚期惡性腫瘤的延緩成為新的可能。然而，迄今為止尚未有任何實驗動物模型既可誘導長時程的穩定疼痛又可直觀地觀察腫瘤生長情況，為上述問題的研究和新藥的研發帶來諸多不便。

發明內容

針對前述問題，本發明提供了一種坐骨神經結扎皮下荷瘤大鼠模型及其在用于篩選鎮痛抗腫瘤藥物中的應用。本發明的目的在于提供一種既具有持續穩定的疼痛特征又能直觀地測定大鼠腫瘤生長情況的實驗性動物模型，用于探索疼痛促進腫瘤生長的機制及篩選新型鎮痛抗腫瘤藥物。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

坐骨神經結扎皮下荷瘤大鼠模型，它通過以下制備方法制得：

（1）、制備腫瘤細胞：將Walker256腫瘤細胞與生理鹽水混勻形成細胞懸液；

取雌性健康Wistar大鼠，每只大鼠腹腔內注射所述Walker256腫瘤細胞懸液，將大鼠飼養至大鼠的腹部出現明顯的膨隆，抽出大鼠的腹水，離心棄去上清后，加入適量生理鹽水，制備成濃度為1×10⁸cells/ml的體內活化的新鮮Walker256腫瘤細胞懸液，2～3小時內使用；

（2）、腫瘤細胞皮下植入：選取雌性健康Wistar大鼠，對其左側腋窩處徹底消毒，吸取所述新鮮Walker256腫瘤細胞懸液接種于大鼠左側腋窩皮下，以形成明顯皮丘為宜；

（3）、坐骨神經結扎：將大鼠稱重后，經麻醉后取俯臥位，剃除毛發，用碘酊和消毒酒精消毒，在坐骨神經三叉分支的近端5mm處，用手術縫合線做三道結扎，每道結扎之間間距1mm，以不影響神經外膜的血運為度，逐層關閉刀口，縫合皮膚前后分別消毒；大鼠恢復3-5天，注意觀察避免傷口發炎。

進一步的：所述步驟（1）中選取的雌性健康Wistar大鼠體重60～80g。

進一步的：所述步驟（1）中每只大鼠腹腔內注射所述Walker256腫瘤細胞懸液2ml，其濃度為1×10⁸個/ml。

進一步的：所述步驟（1）中將大鼠飼養7天后至大鼠的腹部出現明顯的膨隆。

進一步的：所述步驟（2）中選取的雌性健康Wistar大鼠體重175~185g。

進一步的：所述步驟（2）中吸取所述新鮮Walker256腫瘤細胞懸液0.5ml接種于大鼠左側腋窩皮下。

本發明還提供了所述的坐骨神經結扎皮下荷瘤大鼠模型在用于篩選鎮痛抗腫瘤藥物中的應用。

進一步的：將待篩選的鎮痛抗腫瘤藥物腹腔注射于所述坐骨神經結扎皮下荷瘤大鼠模型，給藥后1小時，對大鼠的自發痛、機械痛閾和熱痛閾疼痛指標進行檢測。

進一步的：將待篩選的鎮痛抗腫瘤藥物腹腔注射于坐骨神經結扎皮下荷瘤大鼠模型，每日注射2次，連續注射7日，對成瘤率、大鼠的體重和腫瘤體積進行檢測。

進一步的：待篩選的鎮痛抗腫瘤藥物的注射量為5mg/kg~10mg/kg。