[發明專利]一種基于熒光共振能量轉移技術的血管活性腸肽I型受體抑制劑高通量篩選方法在審
| 申請號： | 201510828140.2 | 申請日： | 2015-11-20 |
| 公開（公告）號： | CN105466897A | 公開（公告）日： | 2016-04-06 |
| 發明（設計）人： | 嚴明;沈靈;孫丹丹;何玲;張陸勇 | 申請（專利權）人： | 中國藥科大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 211215 江蘇省南*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 熒光 共振 能量 轉移 技術 血管 活性 受體 抑制劑 通量 篩選 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種血管活性腸肽I型受體抑制劑高通量篩選模型，其特征在于，包括步驟：
(1)血管活性腸肽I型受體抑制劑篩選模型的建立與優化；
(2)陽性藥驗證模型可靠性；
(3)高通量篩選模型驗證。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中進行確定VIP和血管活性腸肽I型受體細胞最適濃度的實驗。
3.如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，配制不同濃度的VIP，每孔加入5μl，再每孔加入5μl含血管活性腸肽I型受體細胞的1×反應buffer，室溫孵育45分鐘，檢測熒光強度，確定最適VIP濃度為236μM；配制不同濃度的血管活性腸肽I型受體細胞，每孔加入5μl，再每孔加入5μl含VIP的1×反應buffer，室溫孵育45分鐘，檢測熒光強度，確定最適多血管活性腸肽I型受體細胞濃度為500cells/well。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)配制不同濃度的陽性藥VIP(1-7)-GRF(8-27)，每孔加入2.5μl，配制最適濃度的VIP，每孔加入5μl(空白對照加5μl1×反應buffer)，室溫孵育45分鐘，檢測熒光強度，計算得出陽性藥的IC50為2980μM。
5.權利要求1-5中所述任一所述的方法在篩選血管活性腸肽I型受體抑制劑的應用。
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