[發明專利]一種番木鱉堿的提取方法

在審

• 申請號: 201510828006.2
• 申請日: 2015-11-24
• 公開（公告）號: CN105384747A
• 公開（公告）日: 2016-03-09
• 發明（設計）人: 張耀洲;李上文
• 申請（專利權）人: 正源堂（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: C07D491/22
• 分類號: C07D491/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及天然化合物提取技術領域，具體涉及一種番木鱉堿的提取方法。

背景技術

生物堿類化合物在中藥動物藥中分布廣泛，其化學結構復雜多樣，生物活性顯著。一些結構新穎的生物堿具有引人注目的生理和藥理活性，有可能是治療一系列人類重大疾病藥物的重要來源。番木鱉堿(又稱士的寧)就是這樣的一種生物堿類化合物，是廣泛存在于植物體內的一種重要的天然活性成分，其結構如下：

目前發現番木鱉堿有如下作用：第一，其對增殖分化的細胞以及腫瘤細胞具有抑制其增殖分化和細胞毒性的作用，誘導細胞凋亡，因此，番木鱉堿抑制腫瘤的活性；第二，對消化系統的作用，用病人腸痿管直接測驗證明，番木鱉堿對人體胃腸平滑肌沒有興奮作用，對消化道的唯一作用，是由于它的苦味，反射地增加胃的分泌；第三，對呼吸系統的影響：馬錢子堿的作用為番木鱉堿的1/8，據報道它對氨水及SO2引起的小鼠與咳嗽，有較強的鎮咳作用，口服較腹腔注射作用顯著，另有袪痰作用(小白鼠酚紅法)；第四，番木鱉堿有箭毒樣作用，對某些細菌，在試管內有抑制作用，非洲產多種馬錢屬植物，其中有些也具有肌肉松弛作用；第五，種子中的生物堿番木鱉堿，口服后很快吸收而起作用，首先興奮脊髓的反射機能，其次興奮延髓中的呼吸中樞中樞及血管運動中樞，并提高大腦皮質感覺中樞(皮質分析器)的機能。

文獻報道從馬錢子中提取士的寧的經典方法如下：用石灰水浸泡馬錢子，再以苯作溶劑提取并回收大部分苯后以鹽酸萃取，萃取液析出士的寧粗結晶，重結晶獲取高純度的鹽酸士的寧。缺點為溶劑價格高，環境污染大，安全性差(苯的毒性大)，而且對設備要求嚴格，需嚴防溶劑泄露。

公告號為CN101838273B的中國發明專利公開了一種從馬錢子中提取士的寧的方法，依次通過水回流提取，添加高分子絮凝劑吸附澄清，調節pH析出沉淀A，硫酸或磷酸溶解沉淀A，再調節pH析出沉淀B，稀鹽酸溶解沉淀B，結晶，重結晶得純度最高達95.7的終產品。該方法步驟繁瑣，且由于采用回流提取和結晶方法，重復性差，成功率不高，結果受實驗條件和環境影響大。

公告號為CN104072505A的中國發明專利公開了一種同時提取馬錢子堿和士的寧的方法，主要采用超聲提取，大孔樹脂吸附，硫酸乙醇反復結晶的方法得到鹽酸士的寧，該方法得到的士的寧并非純的士的寧，且方法本身也存在重復性差，體系穩定性差等問題。

所以，到目前為止，在天然產物提取物中提取番木鱉堿的方法總的來說比較繁瑣，重復性差，可操作性不高，更不用說提取到高純度或者單體番木鱉堿了，這在一定程度上也阻礙了番木鱉堿作為中藥開發方面的進展。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對以上現有技術問題，提供一種從馬錢子中提取番木鱉堿的方法，該方法采用二維高效液相色譜進行分離純化，分離方法穩定，重復性高，制備量大，操作簡單省時，得到的番木鱉堿單體化合物純度可以達到99％以上。

本發明所采用的技術方案為：

一種番木鱉堿的提取方法，該方法包括以下步驟：

(1)以馬錢子子實體為原料，磨成粉末狀后，用乙醇浸泡或者回流提取，過濾，所得濾液進行旋轉蒸發至干，用甲醇體積分數為50-70％的甲醇-水二元混合溶劑溶解，得到固含量為50-200mg/mL的提取液；

(2)對得到的提取液進行液相色譜分離：采用的色譜柱為C18色譜柱，流動相為二元混合液相，其中A相為水、B相為甲醇；進樣量為50-200mL/針；流動相流速為100-1000mL/min；檢測器為紫外檢測器，檢測波長200-260nm；洗脫方式為B相濃度25％等度洗脫10min、B相濃度35％等度洗脫20min、B相濃度100％等度洗脫10min；根據紫外吸收光譜收集其中7號峰(保留時間23-25min)作為目的組分，旋轉蒸發至干，得到一維液相組分；

(3)用甲醇體積分數為50-70％的甲醇-水二元混合溶劑溶解一維液相組分，溶解至固含量為50-100mg/mL；

(4)進行二維液相色譜分離：采用的色譜柱為C18色譜柱，采用的流動相為二元混合液相，其中A相為水、B相為甲醇；進樣量為500-2000μL/針；流動相流速為10-30mL/min；檢測器為紫外檢測器，檢測波長200-260nm；洗脫方式為B相濃度33％等度洗脫40-50min；根據紫外吸收光譜收集其中1號峰(保留時間18-20min)作為目的組分，旋轉蒸發濃縮至干，得到目標產物番木鱉堿。

所述步驟(1)中回流提取可重復進行1-3次，每次1-2h。