[發(fā)明專利]一種制備胰凝乳蛋白酶的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510826531.0
• 申請日: 2015-11-25
• 公開（公告）號: CN105368810A
• 公開（公告）日: 2016-03-02
• 發(fā)明（設計）人: 劉乃山;趙葉華;劉翠珍
• 申請（專利權）人: 青島康原藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N9/76
• 分類號: C12N9/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備胰凝乳蛋白酶的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

（1）水解：將新鮮或冷凍動物胰臟絞碎置于容器中，加入丙酮攪拌脫水，離心得沉淀物，加入水及胰酶攪拌溶解，用氫氧化鈉溶液調至pH值，保溫攪拌，再加入硅藻土充分攪拌，過濾；

（2）沉淀：收集濾液，加入丙酮攪勻，靜置，虹吸棄去上層丙酮清液，然后用丙酮洗滌沉淀物，過濾甩干，干燥；得胰凝乳蛋白酶粗品；

（3）提純：將粗品用磷酸緩沖液溶解，攪拌混合，靜置，然后加入硅藻土拌勻，過濾；往濾液中加入硫酸銨，過濾后可得鹽析物；將鹽析物再溶于碳酸緩沖液，然后在攪拌下逐滴加入飽和硫酸銨溶液，靜置，過濾；

（4）濾取晶體并用水沖洗，冷凍干燥，即可得胰凝乳蛋白酶。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）中，丙酮與胰臟的比例為2~5L：1kg，丙酮溫度0℃以下；氫氧化鈉溶液濃度為6%~10%；溶液的pH值調節(jié)到6.0~9.0；于15℃~25℃保溫攪拌約1~3小時；過濾前，加入硅藻土進行充分攪拌。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中，丙酮與濾液的體積比為1.5~3:1；靜置時間為：10~14小時；棄去上清液后，用丙酮洗滌沉淀物。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3）中，粗品與磷酸緩沖液的比例是：1g:45~60ml；溶液于15℃~25℃靜置15~25小時；按照溶液的體積加入其量3%~7%重量的硅藻土；往濾液中加入硫酸銨的量為使溶液的濃度達到35%~45%；鹽析物與碳酸緩沖液的比例是：1g:8~10ml；加入飽和硫酸銨溶液的量為至溶液微渾；靜置溫度是：0℃~8℃，時間為：48~72小時。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：得到的胰凝乳蛋白酶晶體要進行冷凍干燥。