[發明專利]一種抗動脈硬化魷魚蛋白質短肽的分離方法

在審

• 申請號: 201510825614.8
• 申請日: 2015-11-25
• 公開（公告）號: CN105349604A
• 公開（公告）日: 2016-02-24
• 發明（設計）人: 楊勁峰;吳文惠;孟嘵琴;包斌
• 申請（專利權）人: 榮成廣潤水產食品有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及肽的制備，尤其是一種從魷魚內臟中得到抗動脈硬化魷魚蛋白質短肽的分離方法。

背景技術

隨著我國遠洋捕撈業的迅速發展，魷魚已經成為我國主要的水產加工原料。一直以來魷魚的加工利用基本停留在其胴體上，內臟、足、耳等一些加工副產物利用率較低，而這些廢棄物中含有豐富的蛋白質。魷魚內臟約占魷魚濕重的15%，而魷魚內臟含有約19%的蛋白質。目前，魷魚內臟采用酶解發酵法，可作為制造醬油或天然調味品的原料。國外如西班牙和日本已有魷魚醬油的生產與銷售，而國內也有天然調味品研究報道。但是如何高效對魷魚內臟進行水解以得到活性短肽的研究較少。

心腦血管疾病是全球人類死亡的首因，動脈硬化是其中最常見而重要的類型，至今還沒有良藥。近年研究發現短肽類活性物質能夠抑制諸多器官如心、肺、腎、肝的纖維化。

發明內容

為了克服現有技術中魷魚內臟利用率低、附加值小的不足，本發明提供一種工藝合理、操作可行、具有抗動脈硬化活性、附加值高的抗動脈硬化魷魚蛋白質短肽的分離方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種抗動脈硬化魷魚蛋白質短肽的分離方法，其特征在于：經過下列工藝步驟：

(1)原料預處理：選取新鮮的魷魚內臟為原料，放入組織搗碎機中搗碎，按照1︰1～3的比例加入去離子水，混勻，得魷魚內臟漿液；

(2)酶解：將步驟(1)中得到的魷魚內臟漿液放入容器中，加入酶活力0.5～1萬U的蛋白酶，置于預熱的恒溫水浴鍋中，恒溫溫度為55±5℃，計時酶解；酶解完畢后，將酶解液置于沸水浴中加熱滅酶10-15min，冷卻至室溫后，控溫離心，得到魷魚內臟酶解液；

(3)酶解液分離：將步驟(2)中得到的魷魚內臟酶解液用去離子水溶解，采用HP-20樹脂柱進行層析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液對酶解液進行梯度洗脫，收集甲醇洗脫液，旋轉蒸發濃縮，得魷魚內臟短肽。

進一步，本發明的一種抗動脈硬化魷魚蛋白質短肽的分離方法，其還經過下列工藝步驟：

(4)抗動脈硬化活性評價：將步驟(3)得到的魷魚內臟短肽進行HMG-CoA還原酶抑制活性評價。

所述的蛋白酶為堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、動物蛋白酶、風味蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種。

所述的控溫離心是控制溫度4℃，離心機轉速控制6000～8000r/min，離心10～20min。

所述的HMG-CoA還原酶抑制活性評價，其方法為：圓底96孔平板孔內注入2.5mmol/LHMG-CoA、2-8U/mgHMG-CoA還原酶、10mmol/LNADPH和魷魚內臟短肽，構成50μL的反應體系；在37℃于337nm處每隔4min連續測定80min，通過NADPH吸光度的變化以評定魷魚內臟短肽對HMG-CoA還原酶的抑制作用；

其HMG-CoA還原酶抑制率的計算公式為：；

其中，在計算公式中，R為抑制率(%)；

K_i和K_C分別為樣品和對照組的吸光度直線斜率。

本發明采用酶解法制備魷魚內臟酶解液，魷魚內臟酶解液采用HP-20樹脂柱進行層析，依次以水、20%、60%、80%的甲醇溶液對酶解液進行梯度洗脫，收集甲醇洗脫液，旋轉蒸發濃縮，最終得到具有抗動脈硬化作用的活性短肽。本發明提取得到的魷魚內臟短肽可作為藥劑學方面的輔料，可制成供臨床應用片劑、軟膠囊劑、顆粒劑、沖劑、口服液、注射劑，其附加值高。本發明工藝合理、操作可行，適合規模化工廠生產，且提取得到的魷魚內臟短肽進行HMG-CoA還原酶抑制活性評價，證明具有抗動脈硬化的活性。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明做進一步說明。

實施例1

一種抗動脈硬化魷魚蛋白質短肽的分離方法，經過下列工藝步驟：

(1)原料預處理：選取新鮮的魷魚內臟為原料，放入組織搗碎機中搗碎，按照1︰2的比例加入去離子水，混勻，得魷魚內臟漿液；

(2)酶解：將步驟(1)中得到的魷魚內臟漿液放入容器中，加入酶活力8000U的堿性蛋白酶，置于預熱的恒溫水浴鍋中，恒溫溫度為55℃，計時酶解，每隔10min用玻璃棒攪拌一次；酶解完畢后，將酶解液置于沸水浴中加熱滅酶15min，冷卻至室溫后，控制溫度4℃，離心機轉速控制8000r/min，離心10min，得到魷魚內臟酶解液；