[發明專利]一種抗手足口病藥物活性檢測方法及其試劑盒有效
| 申請號： | 201510822325.2 | 申請日： | 2015-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN105255995B | 公開（公告）日： | 2019-02-05 |
| 發明（設計）人： | 蕭偉;曹澤彧;丁玥;曹亮;李娜;丁崗;王振中 | 申請（專利權）人： | 江蘇康緣藥業股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/66 | 分類號： | C12Q1/66;C12Q1/37 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 趙青朵 |
| 地址： | 222047 江蘇省連云港市經濟*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 手足口病 蛋白酶 手足口病毒 藥物活性檢測 檢測 熒光素酶 試劑盒 受試物 醫藥技術領域 熒光素酶質粒 核苷酸序列 干擾因素 酶促反應 生物發光 體外重組 細胞轉錄 藥物活性 藥物篩選 螢光素酶 靈敏度 兼容性 熒光素 可用 試品 體外 工作量 篩選 翻譯 開發 | ||
1.一種抗手足口病藥物活性檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
將編碼Gln-Gly的核苷酸序列插入熒光素酶質粒，經體外非細胞轉錄翻譯獲得含Gln-Gly的重組熒光素酶；
體外重組表達手足口病毒蛋白酶，所述手足口病毒蛋白酶為2A或3C蛋白酶；
在非細胞體系的、pH值為7～8的檢測體系下，所述手足口病毒蛋白酶與所述含Gln-Gly的重組熒光素酶、受試物發生酶促反應，檢測熒光素的生物發光強度，獲得所述受試物的抗手足口病藥物活性；
所述手足口病毒選自柯薩奇病毒A2、A4、A5、A7、A9、A10、A16型，柯薩奇病毒B1、B2、B3、B4和B5型，腸道病毒71型，以及埃可病毒。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述酶促反應的反應體系為：
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述酶促反應的溫度為30℃，時間為1～4h。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述受試物的抗手足口病藥物活性的獲得方法為：根據生物發光強度，獲得受試物的抑制率。
5.一種抗手足口病藥物活性檢測試劑盒，其特征在于，包括：
含Gln-Gly的重組熒光素酶；
手足口病毒蛋白酶；所述手足口病毒蛋白酶為2A或3C蛋白酶；
Hepes緩沖液；
螢光素檢測試劑。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述含Gln-Gly的重組熒光素酶為：將編碼Gln-Gly的核苷酸序列插入熒光素酶質粒，經體外非細胞轉錄翻譯獲得含Gln-Gly的重組熒光素酶。
7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，編碼所述Gln-Gly的核苷酸序列為CAAGGU。
8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光素酶質粒為pGloSensorTM-10F質粒。
9.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述Hepes緩沖液的濃度為10～100mM，pH 7.0～8.0。
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