[發明專利]一種提高轉基因雞孵化率的方法及使用的蛋殼開口器

在審

• 申請號: 201510821124.0
• 申請日: 2015-11-23
• 公開（公告）號: CN105274145A
• 公開（公告）日: 2016-01-27
• 發明（設計）人: 徐廷生;雷雪芹;史明艷;李振紅;宋禎;王攀林
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12N15/89
• 分類號: C12N15/89;C12M1/00
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

1.一種提高轉基因雞孵化率的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)孵化器的消毒及種蛋的預孵化處理

對孵化器進行消毒，種蛋進行預孵化處理，放入孵化箱內開始孵化；1-18d的孵化溫度為37.8℃，濕度為60％，19-21d的孵化溫度為37℃，濕度為78％；

(2)種蛋的開口

開口前將蛋殼開口器和無菌操作臺進行消毒，將孵化12-24h的種蛋從孵化箱內取出，在種蛋的赤道位置先用碘酊后用75％酒精擦拭消毒，用砂輪在蛋殼赤道面處研磨，一邊研磨一邊用酒精棉球擦拭蛋殼碎末，直至蛋殼赤道面上出現開口，觀察雞胚孵育情況；

(3)外源基因的注射

將開口后的雞蛋，開口向上，放在操作臺內靜置2min，使雞胚盤的位置漂浮在雞蛋的開口處，將含有外源基因的轉染液注射入雞的胚盤中，用抗生素對開口處進行殺菌；

(4)種蛋的封口

種蛋的封口采用蛋清+蛋殼膜封口的方法，封口后放入孵化箱繼續孵化；其中蛋清+蛋殼膜封口的方法為：將蛋殼膜在蛋清中潤洗，然后在開口處覆蓋第一層蛋殼膜，再在第一層蛋殼膜上交叉覆蓋第二層蛋殼膜。

2.根據權利要求1所述的提高轉基因雞孵化率的方法，其特征在于，步驟(1)中孵化器的消毒方法為：將孵化器進行清洗，關閉進出氣孔和風機，按照每立方米空間高錳酸鉀10g，福爾馬林15mL的比例依次加入高錳酸鉀和福爾馬林，混合，當混合溶液冒煙時，關閉孵化器門，消毒1h，消毒溫度為15-20℃，濕度≥75％。

3.根據權利要求1所述的提高轉基因雞孵化率的方法，其特征在于，步驟(1)中種蛋的預孵化方法為：將新潔爾滅和水按照質量比1:1000的比例配制成新潔爾滅溶液，其中水溫為30℃，將種蛋浸入新潔爾滅溶液中5min，洗凈，取出，用脫脂棉擦拭干凈。

4.根據權利要求1所述的提高轉基因雞孵化率的方法，其特征在于，步驟(3)中抗生素的制備方法：將青鏈霉素加入生理鹽水中，使其終濃度為0.1μg/μL。

5.一種權利要求1-4任一項方法中使用的蛋殼開口器，其特征在于，所述蛋殼開口器包括手柄，手柄的一端設置有磨輪，另一端的端面上設置有置物凹槽，置物凹槽內裝有酒精棉球。

6.根據權利要求5所述的蛋殼開口器，其特征在于，所述磨輪中心處設置有盲孔，盲孔的內壁上設置有內螺紋，手柄與磨輪相連的一端外側設置有與盲孔內螺紋匹配的外螺紋，磨輪通過內螺紋、外螺紋與手柄旋接在一起，構成可拆卸的一體結構。

7.根據權利要求5所述的蛋殼開口器，其特征在于，所述磨輪為圓形。

8.根據權利要求7所述的蛋殼開口器，其特征在于，所述磨輪直徑為1.25cm。

9.根據權利要求5所述的蛋殼開口器，其特征在于，所述酒精棉球伸出置物凹槽。

10.根據權利要求5所述的蛋殼開口器，其特征在于，所述的手柄未安裝磨輪的一端套裝有兩端開口的中空塑料管，中空塑料管的內腔作為置物凹槽，酒精棉球置于置物凹槽內。