[發明專利]一種苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201510814308.4
• 申請日: 2015-11-23
• 公開（公告）號: CN105738611A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 許麗;張雪春;趙魯;程言君
• 申請（專利權）人: 輕工業環境保護研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測苯并(a)芘的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括如下組分：

(1)包被有苯并(a)芘抗原的酶標板(96孔)；

(2)苯并(a)芘特異性抗體；

(3)苯并(a)芘標準品溶液；

(4)酶標二抗；

(5)樣品稀釋液；

(6)抗體稀釋液；

(7)顯色液；

(8)終止液。

2.根據權利要求1所述的苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述苯并(a)芘抗原由苯并(a)芘半抗原和載體蛋白通過活性脂法偶聯得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

3.根據權利要求1所述的苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述樣品稀釋液為含有30％甲醇、1％～5％牛血清白蛋白和0.05％吐溫20，pH7.4的磷酸鹽緩沖液，其中磷酸鹽緩沖液主要成分含量為KH₂PO₄0.2％，Na₂HPO₄3％，NaCl8％，KCl0.2％。

4.根據權利要求1所述的苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述抗體稀釋液為含有1％牛血清白蛋白和0.01％吐溫20，pH7.4的磷酸鹽緩沖液，其中磷酸鹽緩沖液主要成分含量為KH₂PO₄0.2％，Na₂HPO₄3％，NaCl8％，KCl0.2％。

5.根據權利要求1所述的苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述苯并(a)芘特異性抗體為權利要求2中所述苯并(a)芘抗原按常規免疫方法制備得到的單克隆抗體或多克隆抗體。其工作液為特異性抗體與上述抗體稀釋液按照1∶5000～10000的比例混合。

6.根據權利要求1所述的苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述酶標二抗為羊抗鼠或羊抗兔抗體，所用工作液為酶標抗體與上述抗體稀釋液按照1∶100～200的比例混合。

7.根據權利要求1所述的苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述苯并(a)芘標準品溶液濃度為0ppb、4ppb、20ppb、100ppb、500ppb的一系列標準品溶液。

8.根據權利要求1所述的苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述終止液為1～2mol/L硫酸溶液。

9.權利要求1～8任一所述苯并(a)芘酶聯免疫試劑盒在檢測苯并(a)芘殘留時的使用方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)將試劑盒從冷藏環境中取出，平衡至室溫；

(2)將標準品或經過前處理的待測樣品加入已經包被有苯并(a)芘抗原的酶標板孔內，再依次加入抗體工作液和酶標二抗工作液，輕拍混勻，室溫孵育；

(3)用蒸餾水或去離子水進行洗滌；

(4)在每孔中加入顯色液，輕拍混勻，室溫避光孵育；

(5)在每孔中加入終止液，混合均勻，在450nm波長下酶標儀讀取吸光值；

(6)檢測結果分析，根據標準品濃度和相對吸光值繪制標準曲線，計算加樣孔中樣品濃度，確定實際樣品中苯并(a)芘含量。

10.根據權利要求9所述苯并(a)芘酶聯免疫檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，(2)所述的前處理是指濃度含量較低的水樣和土壤樣品需要經過前處理過程才可用于檢測。