[發明專利]一種毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法

在審

• 申請號: 201510807869.1
• 申請日: 2015-11-19
• 公開（公告）號: CN105588890A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 楊春;高言明;徐東升;唐才林
• 申請（專利權）人: 貴陽中醫學院;貴州理工學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 貴陽派騰陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 52110
• 代理人: 管寶偉

技術領域

本發明涉及一種毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，屬于藥物技術領域。

技術背景

藥用鉤藤為茜草科鉤藤屬常綠藤本植物，攀援狀灌木，以帶鉤的莖枝入藥，它具有清熱平肝、息風定驚功效，現代藥理實驗還證明鉤藤有降壓作用，因此具有很高的藥用價值。2010版中國藥典共收載有5個種，分別為：鉤藤Uncarniarhynchopylla(Miq.)Miq.exHavil.、大葉鉤藤UncarniamacrophyllaWail、毛鉤藤UncarniahirsuteHavil.、華鉤藤Uncarniasinensis(Oliv.)Havil和無柄果鉤藤UncarniasessilifructusRoxb。雖然都被用于臨床，然而由于種的不同，其中的化學成分組成就存在一定差異。藥用鉤藤在我國多地均有生長，主要分布于貴州的有毛鉤藤、鉤藤和華鉤藤三個種。

現有技術中，文獻“鉤藤飲片HPLC指紋圖譜研究”(譚超元等，中國實驗方劑學雜志第18卷第1期，2012年1月)一文中公開了以流動相乙腈(A)-0.385％乙酸銨-冰乙酸水溶液(B)梯度洗脫(0～10min，15％～27％A；10min～40min，27％～35％A)、檢測波長245nm的方法建立鉤藤飲片的HPLC指紋圖譜；文獻“黔產鉤藤HPLC指紋圖譜的研究”(王克英等，中國醫藥指南第10卷第35期，2012年12月)一文中公開以流動相甲醇(A)-0.05％氨水(B)梯度洗脫(0～45min，70％～45％B；45min～75min，45％～35％B；75min～90min，35％～30％B)、流速1.0mL/min、檢測波長245nm的方法建立鉤藤的HPLC指紋圖譜；文獻“鉤藤生物堿HPLC指紋圖譜構建及不同基原種鉤藤藥材的鑒別”(黃樣增等，中藥材2014年02期，2012年12月)一文中公開以流動相乙腈(A)-甲醇(B)-水(10mmol/L三乙胺用磷酸調pH7.5)(C)梯度洗脫(0～15min，5-35％A，45％～5％B；15min～25min，35-30％A，5％～25％B；25min～45min，30-30％A，25％～45％B；45min～52min，30-0％A，45％～95％B)、流速1.0mL/min、檢測波長245nm的方法建立鉤藤的HPLC指紋圖譜；文獻“鉤藤的HPLC指紋圖譜研究”(黃艷萍等，中藥新藥與臨床藥理第21卷第4期，2010年7月)一文中公開了以流動相甲醇(A)-10mmol磷酸二氫銨溶液(B)梯度洗脫(0～5min，80％B；5min～50min，80％～40％B；50min～65min，40％～90％B)、流速1.0mL/min、檢測波長254nm的方法建立不同產地鉤藤的HPLC指紋圖譜；這些檢測方法雖然在一定程度上提高了鉤藤的質量控制標準，但有的存在洗脫程序復雜、操作時間長等缺點，另外對不同種的藥用鉤藤還需要區別對待，且不同時期采收的毛鉤藤藥材，其分析評價還有待研究；為了更好的控制毛鉤藤藥材及其產品的質量，保證用藥的安全性，更好的指導生產，使其從藥材采收、加工等各個環節的控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地，需要不斷研究和摸索出更有利于藥材及其產品鑒別和質量檢測的方法。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法。這種方法針對如下藥材及產品向相關的生產、檢測機構提供檢測的指標、檢測的手段、技術方法等，以便更好的控制該藥材和產品的質量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導藥材的采收、加工、生產，使消費者能全面認識藥材及產品質地，所針對的藥材和產品為：

毛鉤藤藥材，由毛鉤藤藥材單獨制備而成的制劑產品，包括藥品、保健品；制劑劑型包括口服制劑、注射制劑、外用制劑、經皮吸收制劑等。

本發明是這樣構成的：

毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，包括以下內容：

(1)供試品溶液的制備：取待測毛鉤藤樣品，加氨水浸泡，再加入三氯甲烷，甲醇，超聲提取，取出，放冷，過濾，濾液置于水浴上揮干，殘渣用甲醇溶解，搖勻，微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液；

(2)色譜條件：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料：流動相A為乙腈，流動相B為0.1％～0.5％氨水溶液，梯度洗脫，流速為0.8～1.2ml/min、檢測波長為254～260nm、柱溫為20-30℃，記錄時間為50-80min；