[發明專利]一種毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法

在審

• 申請號: 201510807869.1
• 申請日: 2015-11-19
• 公開（公告）號: CN105588890A
• 公開（公告）日: 2016-05-18
• 發明（設計）人: 楊春;高言明;徐東升;唐才林
• 申請（專利權）人: 貴陽中醫學院;貴州理工學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 貴陽派騰陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 52110
• 代理人: 管寶偉

1.毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，包括以下內容：

(1)供試品溶液的制備：取待測毛鉤藤樣品，加氨水浸泡，再加入三氯甲烷，甲醇， 超聲提取，取出，放冷，過濾，濾液置于水浴上揮干，殘渣用甲醇溶解，搖勻，微孔濾膜 過濾，取續濾液作為供試品溶液；

(2)色譜條件：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料：流動相A為乙腈，流動相 B為0.1％～0.5％氨水溶液，梯度洗脫，流速為0.8～1.2ml/min、檢測波長為254～260nm、 柱溫為20-30℃，記錄時間為50-80min；

(3)標準指紋圖譜的建立：以上述方法作為建立毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段；依 據10批或10批以上樣品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留 時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有8～ 12個；

(4)以(1)、(2)所述方法作為待測毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品 的指紋圖譜；

(5)將待測毛鉤藤的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求的部分或 全部：

I.計算待測毛鉤藤的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；

II.待測毛鉤藤指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的20％；

III.待測毛鉤藤指紋圖譜中有5％～50％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共 有峰面積的比值比較，其差值不得大于±50％。

2.如權利要求1所述的毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(1)中 毛鉤藤樣品為毛鉤藤藥材。

3.如權利要求2所述的毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述毛鉤藤藥材 樣品是通過陰干后切段、粉碎過60目篩、經45℃烘干至恒重的方法制備。

4.如權利要求1所述的毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(2)中 梯度洗脫參數為：0～45min，72％～45％B；45min～60min，45％～37％B。

5.如權利要求1所述的毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(3)中 10批或10批以上樣品可以為每月采收一次、連續采收12個月及以上的毛鉤藤藥材。

6.如權利要求1-5任一項所述的毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述方 法包括以下內容：

(1)供試品溶液的制備：取含毛鉤藤為2.0g的待測毛鉤藤樣品粉末，加入1-3mL氨水 浸泡20-40min，再加入三氯甲烷20-30mL，甲醇2-8ml，超聲提取45-75min，取出，放冷， 過濾，濾液置于50-60℃水浴上揮干，殘渣用甲醇溶解于10mL量瓶中并定容至刻度，搖勻， 用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液；

(2)色譜條件：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料：流動相A為乙腈，流動相 B為0.1％～0.3％氨水溶液，梯度洗脫，參數為：0～45min，72％～45％B；45min～60min， 45％～37％B，流速為0.8～1.2ml/min、檢測波長為254～260nm、柱溫為20-30℃，記錄時 間為50-80min；

(3)標準指紋圖譜的建立：以上述方法作為建立毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段；依 據10批或10批以上樣品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留 時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有8～ 12個；

(4)以(1)、(2)所述方法作為待測毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品 的指紋圖譜；

(5)將待測毛鉤藤的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求的部分或 全部：

I.計算待測毛鉤藤的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；

II.待測毛鉤藤指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；

III.待測毛鉤藤指紋圖譜中有5％～50％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共 有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％。

7.如權利要求6所述的毛鉤藤的指紋圖譜檢測方法，其特征在于：所述方法包括以 下內容：

(1)供試品溶液的制備：取含毛鉤藤為2.0g的待測毛鉤藤樣品粉末，加入2mL氨水浸 泡30min，再加入三氯甲烷25mL，甲醇5ml，超聲提取60min，取出，放冷，過濾，濾液置 于60℃水浴上揮干，殘渣用甲醇溶解于10mL量瓶中并定容至刻度，搖勻，用0.45μm微孔 濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液；

(2)色譜條件：色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料：流動相A為乙腈，流動相 B為0.2％氨水溶液，梯度洗脫，參數為：0～45min，72％～45％B；45min～60min，45％～ 37％B，流速為1.0ml/min、檢測波長為254nm、柱溫為25℃，記錄時間為60min；

(3)標準指紋圖譜的建立：以上述方法作為建立毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段；依 據10批或10批以上樣品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留 時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有10個；

(4)以(1)、(2)所述方法作為待測毛鉤藤的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品 的指紋圖譜；

(5)將待測毛鉤藤的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，應符合下列要求的部分或 全部：

I.計算待測毛鉤藤的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；

II.待測毛鉤藤指紋圖譜中，非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；

III.待測毛鉤藤指紋圖譜中有5％～50％的共有峰面積的比值與標準指紋圖譜中各共 有峰面積的比值比較，其差值不得大于±30％。