[發明專利]一種含雞肉基質的志賀氏菌標準物質

有效

• 申請號: 201510805378.3
• 申請日: 2015-11-20
• 公開（公告）號: CN105274187B
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 林杰;柯璐;鄭晶;黃曉蓉;陳彬;徐珊;戴曉麗
• 申請（專利權）人: 福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12R1/01
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

本發明公開了一種含雞肉基質的志賀氏菌標準物質，其具體經保存液的配制、基質預處理、混懸液的配制、標準物質的制備及菌種鑒定、均勻性驗證、定值、穩定性檢驗，制得含菌數為530±24 CFU/瓶的成品。所得含雞肉基質的志賀氏菌標準物質具有良好的均勻性，可解決現有標準物質中雞肉基質難溶于水的問題，且其品質穩定、質量可控，適用于微生物高效、準確的定量檢測。

技術領域

本發明屬于食品微生物技術領域，具體涉及一種含雞肉基質的志賀氏菌標準物質。

背景技術

菌種標準物質是生物特性標準物質中較為特殊的一類，通過使用菌種標準物質能夠有效保證微生物定量檢測高效、準確地運行，但目前國內僅在出入境檢驗檢疫系統內少數幾個局在研制，大部分的標準物質都是靠國外引進。2006年，遼寧出入境檢驗檢疫局所研制的食品中微生物菌落總數標準物質被批準為國家二級標準物質。該標準物質包含兩種研制方法：一種是以模擬食品實物，添加腸桿菌、沙雷氏菌、芽孢桿菌等具有標準號、可溯源性的菌株經冷凍干燥制成的：另一種是以魚粉為基質與上述細菌混合經冷凍干燥制成的，而我國在食品基質的食源性致病微生物標準物質領域仍是空白，因此研制添加基質的微生物定量標準物質有重要意義。

志賀氏菌（Shigella）是一類具有高度傳染性的腸道致病菌，其廣泛存在于各種食品中。人類對志賀氏菌的易感性較高，所以在食物和飲用水的衛生檢驗時，常以志賀氏菌作為指標菌。本發明以志賀氏菌為目標菌，通過添加無菌雞肉粉，配合凍干保護劑，經冷凍干燥、不確定度評估以及對特性值進行均勻性檢測和穩定性追蹤，得到含一定菌數的志賀氏菌標準物質，并形成了一套食品基質的食源性致病微生物標準物質的制備工藝。

發明內容

本發明的目的在于提供一種含雞肉基質的志賀氏菌標準物質，其具有良好的均勻性，且品質穩定、質量可控，適用于微生物高效、準確的定量檢測。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種含雞肉基質的志賀氏菌標準物質，其制備方法包括以下步驟：

1）保存液的配制：將志賀氏菌標準菌株凍干粉用志賀氏菌增菌肉湯溶解后，劃線接種于志賀氏菌顯色培養基上，36±1℃下培養20h-48h；然后挑取單菌落接種于志賀氏菌增菌肉湯中，41.5±1 ℃下培養16h-20h；吸取菌液于無菌離心管中，加入其體積1.5倍、質量濃度為40%的無菌甘油，混合，制成保存液；保存液于-20℃存儲備用，使用前恢復至室溫（22℃）后渦旋10s；

2）基質預處理：將雞肉剔除脂肪組織后，冷凍干燥至脫水率為75%，然后將脫水雞肉粉碎至組織細度為170目，采用⁶⁰Coγ輻射滅菌后分裝備用；

3）混懸液的配制：按1g雞肉基質加入7mL無菌水的比例，將預處理后的雞肉基質與水混合成基質懸液，再加入其3倍體積的保護劑，混合制得混懸液；

4）標準物質的制備：取步驟1）制備的保存液2 μL于200 mL志賀氏菌增菌肉湯中，41.5±1 ℃下進行培養，并利用多功能酶標儀定時取樣測定培養液的OD_{600 nm}值，當OD_{600 nm}為0.270±0.1時停止培養，得新鮮菌液，然后將新鮮菌液按混懸液體積濃度1%加入到步驟3）制得的混懸液中，于臺式恒溫振蕩器上300r/min搖勻30min，再按2mL/瓶進行分裝，其含菌量為8.4×10²~2.5×10³CFU/mL，最后經冷凍干燥，制得標準物質；

5）檢驗：將所得標準物質進行菌種鑒定、均勻性驗證、定值、穩定性檢驗，制得成品。

步驟1）所得保存液的平均菌數為4.3×10⁷CFU/mL。

步驟2）所用雞肉需先經檢測不含抗生素；所用⁶⁰Coγ的輻射劑量為6KGY。