[發明專利]一種含雞肉基質的志賀氏菌標準物質

有效

• 申請號: 201510805378.3
• 申請日: 2015-11-20
• 公開（公告）號: CN105274187B
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 林杰;柯璐;鄭晶;黃曉蓉;陳彬;徐珊;戴曉麗
• 申請（專利權）人: 福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12R1/01
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種含雞肉基質的志賀氏菌標準物質，其特征在于：其制備方法包括以下步驟：

1）保存液的配制：將志賀氏菌標準菌株凍干粉用志賀氏菌增菌肉湯溶解后，劃線接種于志賀氏菌顯色培養基上，36±1℃下培養20h-48h；然后挑取單菌落接種于志賀氏菌增菌肉湯中，41.5±1℃下培養16h-20h；吸取菌液于無菌離心管中，加入其體積1.5倍、質量濃度為40%的無菌甘油，混合，制成保存液；

2）基質預處理：將雞肉剔除脂肪組織后，冷凍干燥至脫水率為75%，然后將脫水雞肉粉碎至組織細度為170目，采用⁶⁰Coγ輻射滅菌后分裝備用；

3）混懸液的配制：按1g雞肉基質加入7mL無菌水的比例，將預處理后的雞肉基質與水混合成基質懸液，再加入其3倍體積的保護劑，混合制得混懸液；

4）標準物質的制備：取步驟1）制備的保存液2 μL于200 mL志賀氏菌增菌肉湯中，41.5±1 ℃下進行培養，并利用多功能酶標儀定時取樣測定培養液的OD_{600 nm}值，當OD_{600 nm}為0.270±0.1時停止培養，得新鮮菌液，然后將新鮮菌液按混懸液體積濃度1%加入到步驟3）制得的混懸液中，于恒溫振蕩器上300r/min搖勻30min，再按2mL/瓶進行分裝，其含菌量為8.4×10²~2.5×10³CFU/mL，最后經冷凍干燥，制得標準物質；

5）檢驗：將所得標準物質進行菌種鑒定、均勻性驗證、定值、穩定性檢驗，制得成品；

步驟3）所述保護劑是將脫脂乳、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、酪氨酸與水按體積比4:0.1:1:0.2:1混合而成；

步驟4）經冷凍干燥后所得標準物質中含菌量為530±24 CFU/瓶。

2.根據權利要求1所述含雞肉基質的志賀氏菌標準物質，其特征在于：步驟1）所得保存液的平均菌數為4.3×10⁷CFU/mL。

3.根據權利要求1所述含雞肉基質的志賀氏菌標準物質，其特征在于：步驟2）所用雞肉需先經檢測不含抗生素；所用⁶⁰Coγ的輻射劑量為6KGY。