[發(fā)明專利]鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群檢測(cè)用引物和探針、以及其檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510801925.0
• 申請(qǐng)日: 2015-11-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105219882A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-01-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李光;馬志遠(yuǎn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/325
• 代理公司: 北京風(fēng)雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 王安娜;李翔

1.用于檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的引物，其特征在于，包括用于檢測(cè)鳥(niǎo)分枝桿菌的上游引物和下游引物，其核苷酸序列分別為序列表中的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；以及用于檢測(cè)胞內(nèi)分枝桿菌的上游引物和下游引物，其核苷酸序列分別為序列表中的SEQIDNO.3和SEQIDNO.4。

2.權(quán)利要求1所述引物的衍生序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的衍生序列，其特征在于：所述衍生序列是在SEQIDNO.1和/或SEQIDNO.2，以及SEQIDNO.3和/或SEQIDNO.4的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)一至十個(gè)堿基的取代、缺失或添加得到的引物序列。

4.用于檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的Taqman探針，其特征在于，包括具有序列表中SEQIDNO.5和SEQIDNO.6的兩個(gè)Taqman探針；兩個(gè)所述探針的5’端標(biāo)記有報(bào)告熒光基團(tuán)，3’端標(biāo)記有淬滅熒光基團(tuán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的Taqman探針，其特征在于，所述具有序列表中SEQIDNO.5的探針的5’端標(biāo)記JOE，3’端標(biāo)記BHQ；所述具有序列表中SEQIDNO.6的探針的5’端標(biāo)記FAM，3’端標(biāo)記BHQ。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述Taqman探針的衍生序列。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的，其特征在于，所述衍生序列是在SEQIDNO.5和/或SEQIDNO.6的基礎(chǔ)上，在序列的5’端和/或3’端添加一個(gè)或多個(gè)堿基得到的序列。

8.一種鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的引物和權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的Taqman探針。

9.一種檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的引物和權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌復(fù)合群的Taqman探針，以待檢測(cè)樣本基因組DNA為模板，進(jìn)行熒光定量PCR，其步驟如下：

1)提取待檢測(cè)樣本基因組DNA；

2)配置熒光定量PCR反應(yīng)體系：模板5μl，10×Taq酶buffer5μl，2.5mMdNTP4μl，用于檢測(cè)鳥(niǎo)分枝桿菌的上游引物和下游引物各2μl，其濃度均為10μM，用于檢測(cè)胞內(nèi)分枝桿菌的上游引物和下游引物各2μl，濃度為10μM，序列表中SEQIDNO.5和SEQIDNO.6的兩個(gè)Taqman探針各1μl，濃度均為10μM，Taq酶2.5U，UNG酶0.01μl，ddH2O補(bǔ)至50μl；

3)進(jìn)行PCR反應(yīng)：反應(yīng)條件為：50℃2min；94℃5min；94℃30s，60℃40s，共40個(gè)循環(huán)；在熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增，收集信號(hào)。