[發(fā)明專利]3型鴨甲肝病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測試劑盒及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510792207.1
• 申請日: 2015-11-17
• 公開（公告）號: CN105256073A
• 公開（公告）日: 2016-01-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪銘書;胡琴;程安春;楊喬;朱德康;陳舜;賈仁勇;孫昆峰;劉馬蜂;吳英;陳孝躍
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.3型鴨甲肝病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測引物對、探針，其特征在于，所述引物對由核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQIDNO.4所示的下游引物組成，所述探針的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。

2.含有權(quán)利要求1所述3型鴨甲肝病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測引物對、探針的試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒反應(yīng)液按總體積20μL計(jì)，由以下組分組成：2×onestepRT-PCRBuffer10μL，RTEnzymeMix0.4μL，E×TaqHSDNA聚合酶0.4μL，20pmol/μL的上游引物0.4μL，20pmol/μL的下游引物0.4μL，10pmol/μL的探針0.8μL，RNA模版2μL，最后用RNaseFreedH₂O補(bǔ)至20μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陰性對照和陽性對照，所述陽性對照為DHAV-3的RNA，所述陰性對照為健康鴨肝臟、健康鴨胚尿囊液及胚體的RNA。

5.利用權(quán)利要求2～4任一項(xiàng)所述試劑盒檢測3型鴨甲肝病毒的方法，其特征在于，熒光定量RT-PCR的反應(yīng)條件為42℃5min，95℃10s(一個(gè)循環(huán))；95℃5s，54℃15s，反應(yīng)進(jìn)行45個(gè)循環(huán)，于54℃進(jìn)行熒光信號采集；用FQ-PCR儀自帶軟件自動(dòng)分析讀取FQ-PCR檢測結(jié)果，以獲得擴(kuò)增曲線，若出現(xiàn)Ct<35且呈對數(shù)增長的特異性擴(kuò)增曲線，則說明樣品中含有3型鴨甲肝病毒；若未出現(xiàn)Ct<35且呈對數(shù)增長的特異性擴(kuò)增曲線，則說明樣品中不含3型鴨甲型肝炎病毒。