[發明專利]一種抗肝腎微粒體1抗體檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201510788511.9
• 申請日: 2015-11-17
• 公開（公告）號: CN105334317A
• 公開（公告）日: 2016-02-17
• 發明（設計）人: 張偉;柳樂;秦楓;崔利歌;趙轉;王健;王靜;馬竹鳳;黃琪;趙婷
• 申請（專利權）人: 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/576
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 徐萍

技術領域

本發明涉及磁微粒化學發光免疫診斷技術領域，特別是涉及一種抗肝腎微粒體1抗體檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

近年來，國內外對于自身免疫性肝病的研究越來越深入，并且進展迅速，涉及到發病機理、臨床診斷、臨床治療、預后、遺傳、以及相關自身抗體及靶抗原的研究。

肝腎微粒體（Liver-kidneymicrosomal,LKM）自身抗體和肝臟炎癥疾病有關，LKM自身抗體與自身免疫型慢性活動性肝炎有關，也稱為LKM-1自身抗體。LKM-1是一種分子量為50KDa的蛋白，最先被發現于鼠肝中，作為細胞色素P450db1。近來研究報道表明，三種P450細胞色素（A2,D6和C9）可以作為肝炎疾病的自身抗原。三種細胞色素均屬于藥物代謝酶，可以被自身抗體識別。

類似LKM-1類循環抗體目前已成為檢測和診斷自免肝的一類重要靶標，對于自免肝類疾病的診斷變得越來越重要，治療方式更多的是通過免疫抑制進行，而病毒誘導的肝炎往往是通過注射干擾素進行治療。因此，區分病毒誘導性肝炎和自身免疫肝炎，對于疾病的治療十分重要。研究報道，感染病毒性肝炎患者，往往伴隨有自身免疫肝炎的發生，因此在進行干擾素治療前，進行自身免肝診斷是十分有必要的。

目前報道的關于檢測LKM-1自身抗體的方法主要有間接熒光抗體（IFA）技術、放射免疫技術（RIA）、電子顯微免疫印跡分析技術、酶聯免疫分析（ELSIA）。傳統的酶聯免疫包含LKM陽性參考血清IgG碎片純化、IgG碎片固相化包被、以及樣本反應階段。

然而，對于此病的檢測，這些方法都存在著不足之處：

一、間接免疫熒光法

該法的基本原理是用特異性的抗體與切片中的抗原結合后，繼用間接熒光抗體，與前面的抗原抗體復合物結合，形成抗原抗體熒光復合物。在熒光顯微鏡下，根據復合物的發光情況來確定所檢測的抗原。該方法評價：由于結合在抗原抗體復合物上的熒光素抗體增多，發出的熒光亮度強，因而其敏感性強。但是其不足也是明顯的：

（1）運用此法可能出現假陽性。

（2）在分析結果時無法根據分子量的大小區分非特異性識別。

（3）操作相對復雜，需要價格較昂貴的熒光顯微鏡，在很多基層醫院難以推廣，也不太適用于標本量較多的實驗室。

（4）熒光測定中的本底較高，熒光免疫技術用于定量測定有一定困難。

（5）結果判定需要有經驗的專業人員，分析結果的客觀性不足。

二、酶聯免疫吸附法

ELISA檢測抗LKM-1抗體，簡便易行，特異性高，與間接免疫熒光法聯合檢測，可為臨床對PBC的診斷和治療提供更為客觀的實驗依據。但與其他生物檢測或免疫檢測比較，這種ELISA檢測方法、技術、工具或產品仍有較多的不足而使其應用受限，這些不足主要包括以下幾個方面：

（1）檢測試劑在檢測過程中為開放方式，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果。

（2）ELISA方法多采用辣根過氧化物酶進行檢測，其檢測范圍和靈敏度都較低。

（3）ELISA方法的檢測時間通常反應是一件較長，完成一個測試所需的總時間一般在2個小時以上，不能完全滿足臨床上的快速診斷的需求。

（4）ELISA方法不能隨機進樣檢測，檢測結果存在滯后性。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種抗肝腎微粒體1抗體檢測試劑盒及檢測方法，具有穩定性好，靈敏度高，重復性好等優點。

為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是：提供一種抗肝腎微粒體1抗體檢測試劑盒，包括生物素化LKM-1抗原、校準品、質控品、AP-抗人IgG抗體、磁微粒試劑、化學發光底物和清洗液，所述生物素化LKM-1抗原為偶聯有生物素的LKM-1抗原，所述AP-抗人IgG抗體是AP標記的抗人IgG抗體，所述磁微粒試劑是表面有親和素SA基團的納米磁微粒懸浮液。

在本發明一個較佳實施例中，所述生物素化LKM-1抗原是生物素與LKM-1抗原分子表面的-NH₂基團反應得到的。

在本發明一個較佳實施例中，所述校準品是由含抗LKM-1抗體的人血清配制而成，用于得到校準曲線；所述質控品是由含抗LKM-1抗體的人血清配制而成。

在本發明一個較佳實施例中，所述磁微粒試劑中磁微粒的直徑為0.1-0.5μm，所述磁微粒具有超順磁性。