[發明專利]檢測屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201510788481.1
• 申請日: 2015-11-17
• 公開（公告）號: CN105403692A
• 公開（公告）日: 2016-03-16
• 發明（設計）人: 韓霜;錢林;何曉靜;丁俊榮;羅薇;李慶春
• 申請（專利權）人: 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/535
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 徐萍

技術領域

本發明屬于醫療器械生物類免疫體外診斷領域，特別是涉及一種檢測過敏原特異性IgE抗體屋塵螨的試劑盒及方法。

背景技術

IgE抗體介導的I型過敏反應性疾病相當普遍，世界各國變態反應疾病的總發病率約為15%-30%，我國大約有5-10%的人受過敏原的襲擾，是當前世界性的重大衛生學問題，被世界衛生組織（WHO）列為二十一世紀重點防治的三大疾病之一。

過敏性疾病是患者吸入、攝食入或者注入含有致敏成分的物質，即稱為過敏原或變應原Allergen，后觸發機體的B細胞產生特異性免疫球蛋白E（ImmunoglobulinE,IgE），從而引發過敏反應（或稱變態反應，Allergy）的疾病及相關癥狀，如過敏性哮喘、枯草熱、蕁麻疹、過敏性鼻炎、濕疹、結膜炎及胃腸道I型過敏性疾病及嚴重過敏反應等。上述過敏性疾病的發生，IgE抗體起關鍵作用。

塵螨中重要的致敏蛋白組分為Derp1和Derf2。塵螨既有共同的過敏原組分，也有種屬特異性的過敏原組分。螨的一些致敏蛋白組分與無脊椎動物具有廣泛的交叉反應性。

在國內，屋塵螨過敏原特異性IgE抗體（D1）檢測臨床上主要以國外進口試劑和免疫組化試劑應用為主，國外進口試劑價格非常昂貴，給患者帶來很大的經濟負擔，不利于在基層普及。具有自主知識產權的國產屋塵螨過敏原特異性IgE抗體（D1）免疫化學發光檢測試劑盒目前還沒有。

因此，有待開發對屋塵螨過敏原特異性IgE抗體（D1）檢測靈敏度高與可靠性并能降低檢測成本的檢測技術。

發明內容

本發明主要解決的技術問題是提供一種屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的試劑盒及方法，該試劑盒性能可靠，靈敏度高，線性范圍寬，可配合全自動儀器使用，能提高檢測靈敏度及可靠性，并降低成本，延長有效期。

提供一種檢測屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的試劑盒，包括校準品、質控品、生物素標記的屋塵螨過敏原溶液、堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE二抗溶液、鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液。

在本發明一個較佳實施例中，所述生物素標記的屋塵螨過敏原溶液的濃度為0.1~1.0ug/ml；所述鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液的濃度為0.1~1.0mg/ml；所述堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE二抗溶液的濃度為0.1~2.0ug/ml。

在本發明一個較佳實施例中，所述校準品的濃度為：0IU/ml、0.35IU/ml、0.7IU/ml、3.5IU/ml、17.5IU/ml、50IU/ml、100IU/ml，所述校準品是IgE蛋白與0.1M、pH值為7.4的Tris-HCl緩沖液配制得到的；所述質控品的濃度為：0.7IU/ml、17.5IU/ml，所述質控品是IgE蛋白與0.1M、pH值為7.4的Tris-HCl緩沖液配制得到的。

在本發明一個較佳實施例中，所述屋塵螨過敏原為能與人體內屋塵螨特異性IgE蛋白結合的抗原，所述生物素標記的屋塵螨過敏原的配制方法為：將屋塵螨過敏原按1:20摩爾比加入到溶于二甲基甲酰胺的生物素中，再用0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液透析得到。

在本發明一個較佳實施例中，所述標記的鼠抗人IgE二抗為能與人體內IgE蛋白特異結合的抗體，所述堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE二抗的配制方法為：將濃度為1.0-5.0mg/mL的堿性磷酸酶溶液與鼠抗人IgE二抗按摩爾比為2-10：1進行混合后并純化，得到堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE二抗，所述純化是用pH為8-9的碳酸氫鹽緩沖液平衡并洗脫，再紫外檢測和記錄純化圖譜，再用0.05M、pH值為6.0的MES緩沖液對堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE抗體稀釋。

在本發明一個較佳實施例中，所述鏈霉親和素標記的納米磁微粒懸浮液的制備過程為：將鏈霉親和素標記的納米磁微粒用磁分離器沉淀，再用0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液重懸，混勻磁分離沉出，并重復清洗，清洗后的納米磁微粒分散于0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液。

提供一種納米磁微粒化學發光法定量檢測血清屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的方法，包括步驟為：

（1）將磁微粒試劑、生物素標記的屋塵螨過敏原和待檢樣本混勻并反應，反應后置于磁場中靜置并去上清，得到第一溶液；

（2）向所述第一溶液中加入堿性磷酸酶標記的鼠抗人IgE二抗混勻并反應，反應后置于磁場中靜置并去上清，得到第二溶液；

（3）向所述第二溶液中加入發光底物并反應，測發光強度；