[發(fā)明專利]檢測(cè)屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510788481.1
• 申請(qǐng)日: 2015-11-17
• 公開（公告）號(hào): CN105403692A
• 公開（公告）日: 2016-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓霜;錢林;何曉靜;丁俊榮;羅薇;李慶春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州浩歐博生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N33/535
• 代理公司: 蘇州廣正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32234
• 代理人: 徐萍

1.一種檢測(cè)屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的試劑盒，其特征在于，包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、生物素標(biāo)記的屋塵螨過敏原溶液、堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人IgE二抗溶液、鏈霉親和素標(biāo)記的納米磁微粒懸浮液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述生物素標(biāo)記的屋塵螨過敏原溶液的濃度為0.1~1.0ug/ml；所述鏈霉親和素標(biāo)記的納米磁微粒懸浮液的濃度為0.1~1.0mg/ml；所述堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人IgE二抗溶液的濃度為0.1~2.0ug/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述校準(zhǔn)品的濃度為：0IU/ml、0.35IU/ml、0.7IU/ml、3.5IU/ml、17.5IU/ml、50IU/ml、100IU/ml，所述校準(zhǔn)品是IgE蛋白與0.1M、pH值為7.4的Tris-HCl緩沖液配制得到的；所述質(zhì)控品的濃度為：0.7IU/ml、17.5IU/ml，所述質(zhì)控品是IgE蛋白與0.1M、pH值為7.4的Tris-HCl緩沖液配制得到的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述屋塵螨過敏原為能與人體內(nèi)屋塵螨特異性IgE蛋白結(jié)合的抗原，所述生物素標(biāo)記的屋塵螨過敏原的配制方法為：將屋塵螨過敏原按1:20摩爾比加入到溶于二甲基甲酰胺的生物素中，再用0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液透析得到。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述標(biāo)記的鼠抗人IgE二抗為能與人體內(nèi)IgE蛋白特異結(jié)合的抗體，所述堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人IgE二抗的配制方法為：將濃度為1.0-5.0mg/mL的堿性磷酸酶溶液與鼠抗人IgE二抗按摩爾比為2-10：1進(jìn)行混合后并純化，得到堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人IgE二抗，所述純化是用pH為8-9的碳酸氫鹽緩沖液平衡并洗脫，再紫外檢測(cè)和記錄純化圖譜，再用0.05M、pH值為6.0的MES緩沖液對(duì)堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人IgE抗體稀釋。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述鏈霉親和素標(biāo)記的納米磁微粒懸浮液的制備過程為：將鏈霉親和素標(biāo)記的納米磁微粒用磁分離器沉淀，再用0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液重懸，混勻磁分離沉出，并重復(fù)清洗，清洗后的納米磁微粒分散于0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液。

7.提供一種納米磁微粒化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)血清屋塵螨過敏原特異性IgE抗體的方法，其特征在于，包括步驟為：

（1）將磁微粒試劑、生物素標(biāo)記的屋塵螨過敏原和待檢樣本混勻并反應(yīng)，反應(yīng)后置于磁場(chǎng)中靜置并去上清，得到第一溶液；

（2）向所述第一溶液中加入堿性磷酸酶標(biāo)記的鼠抗人IgE二抗混勻并反應(yīng)，反應(yīng)后置于磁場(chǎng)中靜置并去上清，得到第二溶液；

（3）向所述第二溶液中加入發(fā)光底物并反應(yīng)，測(cè)發(fā)光強(qiáng)度；

（4）利用已知濃度的校準(zhǔn)品繪制發(fā)光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)步驟（3）得到的發(fā)光強(qiáng)度對(duì)照所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得出待測(cè)血清樣本中特異性IgE的含量。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述反應(yīng)的條件為37℃下反應(yīng)15分鐘，所述靜置的時(shí)間為3分鐘；步驟（1）中還包括對(duì)所述第一溶液用清洗液進(jìn)行清洗，置于磁場(chǎng)中靜置并去上清，清洗重復(fù)2次；步驟（2）中所述反應(yīng)的條件為37℃下反應(yīng)15分鐘，所述靜置的時(shí)間為3分鐘；步驟（2）中還包括對(duì)所述第二溶液用清洗液進(jìn)行清洗，置于磁場(chǎng)中靜置并去上清，清洗重復(fù)2次；步驟（3）中所述反應(yīng)的條件為37℃下反應(yīng)5分鐘，在化學(xué)發(fā)光分析/測(cè)定儀中測(cè)定發(fā)光強(qiáng)度。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法在全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀Lumiray系列上進(jìn)行，所述Lumiray系列為Lumiray1200、Lumiray1220、Lumiray1260或Lumiray1280。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，包括的步驟為：

（1）將所述試劑盒放入全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀的試劑倉里并進(jìn)行識(shí)別；

（2）將校準(zhǔn)品置于所述全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀的儀器樣本倉，識(shí)別校準(zhǔn)品信息，分配校準(zhǔn)品位置；

（3）將質(zhì)控物或待測(cè)樣本置于儀器樣本倉，編輯檢測(cè)信息；

（4）啟動(dòng)運(yùn)行程序，所有校準(zhǔn)品/質(zhì)控物/待測(cè)樣本自動(dòng)進(jìn)行處理得到結(jié)果。