[發(fā)明專利]一種苦蕎的快速再生組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510767830.1
• 申請日: 2015-11-11
• 公開（公告）號: CN105230495A
• 公開（公告）日: 2016-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵繼榮;朱雪梅;王成龍;周美亮;吳燕民;王應(yīng)軍;楊遠(yuǎn)祥;楊占彪;程章
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219
• 代理人: 劉立春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于苦蕎麥組織培養(yǎng)再生技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種苦蕎的快速再生組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

蕎麥?zhǔn)且环N藥食同源的植物，分為苦蕎和甜蕎兩大類。其中，苦蕎(F.tataricumGaertn)在分類學(xué)上屬蓼科(Polygonaceae)，蕎麥屬(Fagopyrum)，一年生雙子葉草本植物?？嗍w發(fā)源于中國，其性味苦、平、寒，有益氣力、續(xù)精神、利耳目、降氣寬腸健胃的作用，具有極高的營養(yǎng)保健功能?？嗍w的種子、根、莖、葉等多種器官中都富含黃酮類物質(zhì)，具有“降血糖、降血壓、降血脂”的作用，被譽(yù)為“三降食品”。隨著對苦蕎營養(yǎng)價值和藥用價值研究的不斷深入，其越來越受到人們的青睞?？嗍w在組培再生及遺傳育種方面的研究還尚處于起步階段，相關(guān)報道并不多見。這主要是由于苦蕎自身的開花習(xí)性及遺傳特點所決定的?？嗍w麥為自花授粉，這就使得許多具有優(yōu)良性狀的基因難以通過人工雜交等方式轉(zhuǎn)入苦蕎中，且在人工雜交過程中還存在植株易被病蟲侵害，而且增殖速度較慢，難以適應(yīng)規(guī)?；a(chǎn)的趨勢，難以滿足旺盛的市場需求。而利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合轉(zhuǎn)基因技術(shù)對現(xiàn)有苦蕎品種進(jìn)行遺傳改良，可以在一定程度上解決苦蕎在育種上所遇到的問題。但是，現(xiàn)有苦蕎再生體系的研究還比較零散，且已經(jīng)報道的相關(guān)研究成果還存在許多需要改進(jìn)的地方。其中，利用傳統(tǒng)組培再生手段對苦蕎麥進(jìn)行再生培養(yǎng)通常再生時間較長，從苦蕎外植體誘導(dǎo)出愈傷組織，再由愈傷組織誘導(dǎo)出再生芽，然后再進(jìn)行再生芽的生根誘導(dǎo)，通常需要12周至16周，且步驟較為復(fù)雜、操作不夠簡便，組培的成本也較高，在實際應(yīng)用中具有一定的局限性。而苦蕎麥在快速再生過程中也存在著部分品種再生芽誘導(dǎo)困難、誘導(dǎo)率低等問題。同時，苦蕎麥的營養(yǎng)價值和藥用價值越來越受到人們的關(guān)注，具有極大的市場潛力。目前采用的組培再生方法又存在著一定的弊端，我國苦蕎麥的快速再生技術(shù)較為落后，這也間接阻礙了我國苦蕎市場的迅速發(fā)展。因此，仍需要進(jìn)一步優(yōu)化組培技術(shù)。雖然苦蕎已實現(xiàn)了經(jīng)由原生質(zhì)體、下胚軸及子葉的組培再生，但是經(jīng)由頂端分生組織的快速再生技術(shù)卻鮮有報道。因而，建立一個更加成熟、高效、迅速的苦蕎快速再生體系對于我國苦蕎麥的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重大的現(xiàn)實意義，這也將為苦蕎轉(zhuǎn)基因研究和分子遺傳育種研究打下良好的基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種苦蕎的快速再生組織培養(yǎng)方法，旨在解決苦蕎麥在組培再生過程中部分品種再生芽誘導(dǎo)困難、誘導(dǎo)率低的的問題。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的，一種苦蕎的快速再生組織培養(yǎng)方法，所述苦蕎的快速再生組織培養(yǎng)方法包括以下步驟：

采用MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基對苦蕎無菌苗的培養(yǎng)；

苦蕎叢生芽的誘導(dǎo)；

苦蕎再生芽的生根；

煉苗和移栽。

進(jìn)一步，所述的MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基組分如下：

20×MS大量元素母液：NH4NO333.0g，KNO338.0g，MgSO4·7H2O7.4g，KH2PO43400mg；

200×MS微量元素母液：KI0.166g，H3BO31.24g，MnSO4·4H2O4.46g，ZnSO4·7H2O1.72g，Na2MnO4·2H2O0.05g，CuSO4·5H2O0.005g，CoCl2·6H2O0.005g；

200×MS鐵鹽母液：FeSO4·7H2O5.56g，Na2-EDTA·2H2O7.46g；

200×MS有機(jī)母液：肌醇20.0g，煙酸0.1g，VB60.1g，VB10.1g，甘氨酸0.4g；

20×MS鈣鹽母液：CaCl26.64g。

進(jìn)一步，所述MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備方法如下：

組分稱量后，使用去離子水溶解并定容到1L；置于121℃高壓滅菌鍋中滅菌15min備用；

MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配置：20×大量元素母液50mL，200×微量元素母液5mL，200×鐵鹽母液5mL，20×鈣鹽母液50mL，200×有機(jī)母液5mL，植物凝膠2.5g，蔗糖30g；

1/2MS培養(yǎng)基的配置：20×大量元素母液25mL，200×微量元素母液2.5mL，200×鐵鹽母液2.5mL，20×鈣鹽母液25mL，200×有機(jī)母液2.5mL，植物凝膠2.5g，蔗糖20g；

使用去離子水定容到1L，再用0.5MNaOH調(diào)節(jié)PH值至5.8—6.2之間，最后，將其置于121℃高壓滅菌鍋中滅菌15min。