[發明專利]一種苦蕎的快速再生組織培養方法

在審

• 申請號: 201510767830.1
• 申請日: 2015-11-11
• 公開（公告）號: CN105230495A
• 公開（公告）日: 2016-01-13
• 發明（設計）人: 邵繼榮;朱雪梅;王成龍;周美亮;吳燕民;王應軍;楊遠祥;楊占彪;程章
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 劉立春

1.一種苦蕎的快速再生組織培養方法，其特征在于，所述苦蕎的快速再生組織培養方法包括以下步驟：

采用MS基礎培養基對苦蕎無菌苗的培養：選取顆粒飽滿的苦蕎種子，在100mg/L的赤霉素溶液中浸泡2h，剝去種皮，用75％的乙醇浸泡60s，再用10％的次氯酸鈉震蕩處理8min；接著使用無菌水沖洗3次，每次5min；最后，將消毒后的種子均勻鋪于濾紙上，吸干表面殘留水分后播撒至MS培養基上，置于光照培養箱中進行無菌苗的培養；

苦蕎叢生芽的誘導：將外植體傾斜置于苦蕎麥叢生芽誘導培養基之中，叢生芽誘導培養基的配置為MS培養基中加入2.0mg/L6-BA和0.5mg/LTDZ，隨后，將接種有外植體的培養皿置于暗室中暗處理2天；之后置于人工光照培養箱中進行叢生芽的誘導；

苦蕎再生芽的生根：將誘導出的苦蕎麥不定芽從基部切下，垂直插入苦蕎麥生根培養基中，生根培養基的配置為1/2MS基礎培養基中添加1.0mg/LIBA，隨后將培養瓶放置于人工光照培養箱中進行生根培養；

煉苗和移栽：選取生根培養基中生長健壯的苦蕎麥再生苗，打開瓶蓋，洗去不定根上的培養基，移栽到裝有營養土的花盆中，室內煉苗4-6天，再將花盆中的再生苦蕎麥幼苗取出，最后移栽至松軟的土壤中生長。

2.如權利要求1所述的苦蕎的快速再生組織培養方法，其特征在于：所述的MS基礎培養基組分如下：

20×MS大量元素母液：NH4NO333.0g，KNO338.0g，MgSO4·7H2O7.4g，KH2PO43400mg；

200×MS微量元素母液：KI0.166g，H3BO31.24g，MnSO4·4H2O4.46g，ZnSO4·7H2O1.72g，Na2MnO4·2H2O0.05g，CuSO4·5H2O0.005g，CoCl2·6H2O0.005g；

200×MS鐵鹽母液：FeSO4·7H2O5.56g，Na2-EDTA·2H2O7.46g；

200×MS有機母液：肌醇20.0g，煙酸0.1g，VB60.1g，VB10.1g，甘氨酸0.4g；

20×MS鈣鹽母液：CaCl26.64g。

3.如權利要求2所述的苦蕎的快速再生組織培養方法，其特征在于：所述MS基礎培養基制備方法如下：組分稱量后，使用去離子水溶解并定容到1L；置于121℃高壓滅菌鍋中滅菌15min備用；

MS基礎培養基的配置：20×大量元素母液50mL，200×微量元素母液5mL，200×鐵鹽母液5mL，20×鈣鹽母液50mL，200×有機母液5mL，植物凝膠2.5g，蔗糖30g；

1/2MS培養基的配置：20×大量元素母液25mL，200×微量元素母液2.5mL，200×鐵鹽母液2.5mL，20×鈣鹽母液25mL，200×有機母液2.5mL，植物凝膠2.5g，蔗糖20g；

使用去離子水定容到1L，再用0.5MNaOH調節PH值至5.8—6.2之間，最后，將其置于121℃高壓滅菌鍋中滅菌15min。

4.如權利要求1所述的苦蕎的快速再生組織培養方法，其特征在于，所述苦蕎麥叢生芽的誘導具體包括：將剪取的苦蕎麥外植體傾斜45°插入苦蕎麥叢生芽誘導培養基之中，每個培養基中接種數5-10個外植體；苦蕎麥叢生芽誘導培養基的配置為MS基礎培養基中添加2.0mg/L6-BA和0.5mg/LTDZ，之后，將接種好苦蕎麥外植體的培養皿置于暗室中進行暗處理，處理時間為2天，之后將其置于人工光照培養箱中進行不定芽的誘導；期間，光照培養箱中光照強度為2000Lux，光照時間為白天16h、夜間8h，溫度為白天25℃、夜間20℃，3-5周后在培養皿中即可得到誘導的不定芽。

5.如權利要求1所述的苦蕎的快速再生組織培養方法，其特征在于，所述苦蕎麥再生芽誘導生根具體包括：將誘導出的苦蕎麥不定芽從基部切下，垂直插入到苦蕎麥生根培養基中，每瓶接種數為8-10株，苦蕎麥生根培養基的配置為1/2MS基礎培養基中添加1.0mg/LIBA；隨后將培養瓶放置于人工光照培養箱中進行生根培養，光照培養箱中光照強度為2000Lux，光照時間為白天16h、夜間8h，溫度為白天25℃、夜間20℃，2-3周后在組培瓶中的不定芽即可生根。