[發(fā)明專利]一種病毒滅活去除純化烏司他丁的方法及提高烏司他丁復(fù)溶性的藥物組合物

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510748468.3
• 申請日: 2015-11-07
• 公開（公告）號: CN105330737A
• 公開（公告）日: 2016-02-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉乃山;林曉磊;劉翠珍
• 申請（專利權(quán)）人: 青島康原藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/57
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1.一種病毒滅活純化烏司他丁的方法，該方法包括：將烏司他丁粗品通過層析、低溫乙醇沉淀、低PH法結(jié)合切向流超濾、凍干步驟進(jìn)行純化，所得純化后的烏司他丁的總收率提高到70%以上，總效價(jià)不低于5000iu/mg，柱效提升約50%，病毒去除率不低于4log。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述烏司他丁粗品是通過以男性尿液為原料，將原料依次經(jīng)過甲殼質(zhì)吸附、氨水洗脫、硫酸銨鹽析制備得到的。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述工序包括如下步驟：

（1）用洗脫液A溶解烏司他丁粗品，攪拌、離心，留取離心液，所述洗脫液A為0.01-0.3mol/L的醋酸鹽緩沖液；

（2）用洗脫液B平衡經(jīng)特異性處理再生的吸附柱，將上述離心液上柱，洗脫液B為0.01-0.5mol/L醋酸鈉和0.1-5mol/LNaCl的緩沖液；

（3）用洗脫液B洗脫吸附柱，收集洗脫液；

（4）用洗脫液C平衡親和層析柱，將超濾液上柱，洗脫液C為0.01-0.5mol/L甘氨酸和0.1-5mol/LNaCl的緩沖液；

（5）上樣結(jié)束后，用洗脫液C洗脫，收集洗脫液；

（6）柱中的親和樹脂經(jīng)洗脫液C洗脫后，用洗脫液D洗滌去除吸附在上面的雜質(zhì)，密封待用，洗脫液D為0.01-0.3mol/L鹽酸和0.1-5mol/LNaCl的緩沖液；

（7）將洗脫液經(jīng)超濾膜，加入磷酸鹽緩沖液反復(fù)超濾，得超濾液；

（8）超濾液中加入低溫乙醇沉淀，離心，固體再用無水乙醇脫水，離心，棄去上清液，留取沉淀物；

（9）沉淀物經(jīng)低PH法處理后，切向流超濾；

（10）凍干，即得烏司他丁。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01-0.5mol/L。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述吸附柱為陰離子交換柱，包括強(qiáng)陰離子交換柱Q-SephadexA-25,Q-SephadexA-50,Q-SephadexC-25,Q-SephadexC-50；弱陰離子交換柱DEAE-CelluloseDE-22，DEAE-CelluloseDE-23，DEAE-CelluloseDE-51，DEAE-CelluloseDE-52，DEAE-CelluloseDE-53。

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的樹脂再生法即一定次序的水洗、酸洗、堿洗處理，提高樹脂柱的效率。

7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述親和層析柱包括：CM-SephadexA-25,CM-SephadexA-50,CM-SephadexC-25,CM-SephadexC-50，SP-Sepharose2B,SP-Sepharose4B,SP-Sepharose6B，SP-SepharoseCL-2B,SP-SepharoseCL-4B,SP-SepharoseCL-6B。

8.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：超濾液中加入低溫乙醇沉淀，低PH法法結(jié)合切向流超濾處理進(jìn)行病毒滅活去除，具體的說，選用-20℃以下、95%以上的乙醇，超濾膜選用截留孔徑20nm的雙層聚醚砜膜，低PH法處理?xiàng)l件選用pH3～6,18～25℃培育15～30天。

9.一種藥物組合物，其含有根據(jù)權(quán)利要求1-8制備的烏司他丁作為活性成分,還含有甘露醇、右旋糖酐70、氯化鈉、磷酸緩沖液。