[發(fā)明專利]胃癌相關(guān)microRNA檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510734239.6
• 申請日: 2015-10-30
• 公開（公告）號: CN106636313B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉蘇燕;吳詩揚(yáng);董艷
• 申請（專利權(quán)）人: 益善生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841;C12Q1/682
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

1.一種胃癌相關(guān)microRNA檢測試劑盒，其特征在于，包括有：針對每種待檢測的胃癌相關(guān)microRNA有一級信號放大探針、二級信號放大探針、三級信號放大探針，以及捕獲探針，所述胃癌相關(guān)microRNA包括:hsa-miR-23b-3p、hsa-miR-378a-5p、hsa-miR-21-5p、hsa-miR-1-3p、hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-27a-3p、hsa-mir-34a以及hsa-miR-423-5p，其中：

所述捕獲探針用于連接目標(biāo)核酸與一級信號放大探針，每條捕獲探針從5’端到3’端依次為特異性P1序列、間隔臂序列、P2序列，針對不同待檢測的胃癌相關(guān)microRNA的P2序列互不相同；

所述一級信號放大探針從5’端到3’端依次為：P4序列、間隔臂序列、P3序列，P3序列與P2序列互補(bǔ)配對；

所述二級信號放大探針從5’端到3’端依次為：P5序列、間隔臂序列、P6序列；

所述P4序列含有至少一個與P5序列互補(bǔ)配對的堿基片段，且每個與P5序列互補(bǔ)配對的堿基片段之間設(shè)有間隔臂序列；

所述三級信號放大探針從5’端到3’端依次為：P8序列、間隔臂序列、P7序列，所述P8序列5’端還修飾有熒光基團(tuán)，針對不同待檢測的胃癌相關(guān)microRNA的熒光基團(tuán)的顏色互不相同或發(fā)射波長互不相同；

所述P6序列含有至少一個與P7序列互補(bǔ)配對的堿基片段，且每個與P7序列互補(bǔ)配對的堿基片段之間設(shè)有間隔臂序列；

所述P2序列、P3序列、P4序列、P5序列、P6序列、P7序列、P8序列均為不存在發(fā)夾結(jié)構(gòu)，各探針內(nèi)部和探針間不形成二聚體、不存在錯配，與整個檢測體系的其它核酸之間均不存在特異性結(jié)合的序列；

所述待檢測的胃癌相關(guān)miRNA的捕獲探針的特異性P1序列包括：針對hsa-miR-23b-3p的SEQ ID NO.1，針對hsa-miR-378a-5p的SEQ ID NO.2，針對hsa-miR-21-5p的SEQ IDNO.3，針對hsa-miR-1-3p的SEQ ID NO.4，針對hsa-miR-20a-5p的SEQ ID NO.5，針對hsa-miR-27a-3p的SEQ ID NO.6，針對hsa-mir-34a的SEQ ID NO.7，針對hsa-miR-423-5p的SEQID NO.8；

所述P2序列包括：SEQ ID NO.9～SEQ ID NO.18；所述P5序列包括：SEQ ID NO.29～SEQID NO.38，所述P7序列包括SEQ ID NO.49～SEQ ID NO.58；所述P4序列中的所述間隔臂序列為3—10個T；所述P6序列的間隔臂序列為2—10個T，所述P8序列為polyT；

所述P4序列包括：SEQ ID NO.19～SEQ ID NO.28，所述P6序列包括：SEQ ID NO.39～SEQ ID NO.48。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胃癌相關(guān)microRNA檢測試劑盒，其特征在于，所述polyT為3-10個T。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胃癌相關(guān)microRNA檢測試劑盒，其特征在于，所述一級信號放大探針中所述P4序列與P3序列之間的間隔臂序列選自5－20個T；二級信號放大探針中所述P5序列與P6序列之間的間隔臂序列選自5－10個T；三級信號放大探針中P7序列與P8序列之間的間隔臂序列選自3－10個T。

4.根據(jù)權(quán)利要1或2所述的胃癌相關(guān)microRNA檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光基團(tuán)選自：FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas Red、LC RED640、Cy5、LC RED705和AlexaFluor 488，且針對不同目標(biāo)核酸的熒光基團(tuán)互不相同。