[發明專利]胃癌相關microRNA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510734239.6
• 申請日: 2015-10-30
• 公開（公告）號: CN106636313B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 劉蘇燕;吳詩揚;董艷
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6841
• 分類號: C12Q1/6841;C12Q1/682
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

本發明涉及一種胃癌相關microRNA檢測試劑盒，包括有：針對每種待檢測的胃癌癌相關microRNA有至少一條一級信號放大探針、至少一條二級信號放大探針、和至少一條三級信號放大探針，以及捕獲探針，所述胃癌相關microRNA的捕獲探針的P1序列選自SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.8。本發明所選擇的捕獲探針和信號放大探針，能夠在均一的反應條件下進行雜交反應，且各種探針之間不存在非特異性結合；所設計的探針在檢測中特異性好、信噪比高。同時，多種探針的組合使用使鑒定試劑盒和檢測方法形成一個檢測效果完好的系統。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體的是涉及一種胃癌相關microRNA檢測試劑盒。

背景技術

MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中發現的一類內源性的具有調控功能的非編碼RNA，其大小長約20～25個核苷酸。成熟的miRNAs是由較長的初級轉錄物經過一系列核酸酶的剪切加工而產生的，隨后組裝進RNA誘導的沉默復合體(RNA-induced silencingcomplex,RISC)，通過堿基互補配對的方式識別靶miRNA，并根據互補程度的不同指導沉默復合體降解靶miRNA或者阻遏靶miRNA的翻譯。最近的研究表明miRNA參與各種各樣的調節途徑，包括發育、病毒防御、造血過程、器官形成、細胞增殖和凋亡、脂肪代謝等等。

近來大量研究表明，胃癌是一種多基因疾病，其發生發展是一個多步驟參與、多種相關基因失活的結果。研究發現，在胃癌中表達失調的miRNA與胃癌的生物學特性存在密切關系。不同的miRNA在胃癌中的表達不同，其中miR-12、miR-191、miR-223、miR-24-1、miR-107、miR-92-2、miR-214、miR-25、miR-221、miR-650等在胃癌中表達升高；而miR-128b、miR-129、miR-148、miR-148a、miR-152、miR-31、miR-375的表達顯著降低。其中，miR-21、miR-191、miR-223、miR-let-7a、miR-106b-25亞群等與胃癌的發生相關；miR-let-7、miR-155與胃癌的清晰與轉移相關；miR-15、miR-16則參與胃癌的耐藥機制。

目前，針對miRNA的檢測方法主要有Northern Blot、基因芯片、熒光定量探針法、基于微球的流式細胞術技術。但NorthernBlot方法敏感度低、耗時長且RNA的用量較大，不適合高通量分析；基因芯片技術能實現miRNA的高通量分析，即在一塊芯片上同時檢測多個miRNA，但缺點是結果準確性低，重復性差，實驗價格昂貴；熒光定量探針法檢測靈敏度高，但檢測費用昂貴；而基于微球的流式細胞術技術將探針固定于微球上并置于液相中，更有利于捕獲miRNA序列，因此提高了準確性，但是由于miRNA同源性高，長度較短，細胞或組織內含量低，針對它的高靈敏高選擇性檢測方法仍然有待進一步完善。

原位雜交技術是一種定位和形態學檢測保存的組織切片或細胞制備物中特異性miRNA序列的方法。然而目前現有技術中對miRNA的多重平行檢測仍存在許多困難。首先，需要分別制備各靶miRNA的標記探針；其次，難以同時原位檢測多種靶miRNA的表達。因此，目前報道的對多種miRNA的檢測只能用不同的標記方法，然而，用不同的標記方法不能很好地控制探針與細胞中非特異性序列可能的交叉雜交。

發明內容

本發明的目的在于提供一種特異性強、靈敏度高的胃癌相關microRNA檢測試劑盒。

實現上述目的的技術方案如下。