[發(fā)明專利]一種檢測(cè)小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510732785.6
• 申請(qǐng)日: 2015-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN105300942A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王鵬;修元澎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 錦州奧鴻藥業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;G01N1/34
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;王春霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)單磷酸腺苷含量的方法，具體涉及一種小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷含量的方法，屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

小牛血清去蛋白藥物是小牛血清經(jīng)去蛋白、濃縮、超濾等工藝制備的一類生物藥，該類藥物中含有小分子多肽、核苷酸、低聚糖等諸多生物活性成份。研究表明該類藥物能夠在缺氧情況下刺激并增加機(jī)體對(duì)葡萄糖和氧的吸收與利用，改善代謝平衡。它能夠刺激細(xì)胞呼吸活性，對(duì)缺氧環(huán)境下的誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用。同時(shí)，它還具有抑制血小板聚集和血栓形成的作用，起到保護(hù)細(xì)胞在缺血缺氧的環(huán)境下的生存能力。

臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小牛血清去蛋白藥物可用于治療腦部血液循環(huán)障礙和營(yíng)養(yǎng)障礙性疾病所引起的神經(jīng)功能缺損而表現(xiàn)出的各種腦功能不全疾病，如缺血性腦梗塞、腦出血等；該藥物也被證實(shí)能夠通過(guò)刺激膠原質(zhì)的合成加速傷口愈合過(guò)程，其對(duì)放射所致的損傷也有很好的治療效果。它還用于輔助治療消化系統(tǒng)疾病，對(duì)肝損傷有保護(hù)作用。研究還表明該類藥物可以通過(guò)增加神經(jīng)元和突觸數(shù)量起到神經(jīng)保護(hù)的作用來(lái)治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病，在輔助治療老年癡呆癥也取得了一定的效果。

小牛血清去蛋白藥物的藥理藥效與其生物活性成份密切相關(guān)，因此研究其活性成份的檢測(cè)方法，可為進(jìn)一步了解其藥理活性提供科學(xué)依據(jù)。該類藥物的活性成份之一為單磷酸腺苷(Adenosinemonophosphate，簡(jiǎn)稱AMP)，是一種在核糖核酸(RNA)中發(fā)現(xiàn)的核苷酸。它是一種磷酸及核苷腺苷的酯，并由磷酸鹽官能團(tuán)、戊糖核酸糖及堿基腺嘌呤所組成。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FluorescenceResonanceEnergyTransfer，F(xiàn)RET)體系，是指當(dāng)兩個(gè)熒光分子距離靠近時(shí)(小于10nm)發(fā)生的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，其中一個(gè)作為能量供體，另外一個(gè)為能量受體。FRET體系可以使能量受體的熒光發(fā)射強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，因此可以明顯提高基于此原理設(shè)計(jì)的熒光探針傳感器的檢測(cè)能力。近年來(lái)，以量子點(diǎn)為基礎(chǔ)的熒光共振能量轉(zhuǎn)移探針備受關(guān)注，廣泛應(yīng)用于小分子的識(shí)別、金屬離子的檢測(cè)、生物大分子的檢測(cè)、細(xì)胞成像以及疾病診斷等方面。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷(AMP)的方法，具體是利用一種熒光共振能量轉(zhuǎn)移探針件檢測(cè)，本發(fā)明方法通過(guò)對(duì)樣品的前處理，提高了對(duì)單磷酸腺苷的選擇性，排除了樣品中其他雜質(zhì)的干擾。

本發(fā)明所提供的檢測(cè)小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷含量的方法，包括如下步驟：

(1)測(cè)定熒光共振能量轉(zhuǎn)移探針于526nm處的熒光發(fā)射峰的強(qiáng)度，記作F₀；

(2)向所述熒光共振能量轉(zhuǎn)移探針中加入待測(cè)的小牛血清去蛋白注射液進(jìn)行反應(yīng)；測(cè)定所述反應(yīng)后的體系于526nm處的熒光發(fā)射峰的強(qiáng)度，記作F；

(3)根據(jù)式(1)所示的Stern-Volmer方程，即能計(jì)算出所述小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷的含量；

F0F=1+kQτ0[Q]=1+KD[Q]---(1)]]>

式(1)中，[Q]表示待測(cè)小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷的摩爾濃度，τ₀表示所述熒光共振能量轉(zhuǎn)移探針的平均熒光壽命，為1.5×10^-9s，k_Q表示熒光淬滅速率常數(shù)，為1.2×10¹¹L·mol^-1·s^-1，K_D表示Stern-Volmer常數(shù)；