[發明專利]一種檢測小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷含量的方法

在審

• 申請號: 201510732785.6
• 申請日: 2015-10-29
• 公開（公告）號: CN105300942A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 王鵬;修元澎
• 申請（專利權）人: 錦州奧鴻藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/34
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王春霞

1.一種檢測小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷含量的方法，包括如下步驟：

(1)測定熒光共振能量轉移探針于526nm處的熒光發射峰的強度，記作F₀；

(2)向所述熒光共振能量轉移探針中加入待測的小牛血清去蛋白注射液進行反應；測定所述反應后的體系于526nm處的熒光發射峰的強度，記作F；

(3)根據式(1)所示的Stern-Volmer方程，即能計算出所述小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷的含量；

F0F=1+kQτ0[Q]=1+KD[Q]---(1)]]>

式(1)中，[Q]表示待測小牛血清去蛋白注射液中單磷酸腺苷的摩爾濃度，τ₀表示所述熒光共振能量轉移探針的平均熒光壽命，為1.5×10^-9s，k_Q表示熒光淬滅速率常數，為1.2×10¹¹L·mol^-1·s^-1，K_D表示Stern-Volmer常數；

所述熒光共振能量轉移探針的能量供體和能量受體分別為β-環糊精修飾的ZnS量子點和三羥基黃酮，所述β-環糊精修飾的ZnS量子點的粒徑為2～4nm；所述熒光共振能量轉移探針的pH值為4.5；

所述待測的小牛血清去蛋白注射液是按照包括如下步驟的方法進行前處理的：

1)向所述待測的小牛血清去蛋白注射液中加入NaOH水溶液，并進行煮制，將體系的pH值調至6.8～7.2；

2)向步驟1)處理后的體系中計入活性炭進行吸附；

3)將步驟2)處理后的體系用微孔膜進行過濾；

4)對經步驟3)處理后的體系進行固相萃取，洗脫劑為甲醇，收集洗脫液，即完成對所述小牛血清去蛋白注射液的前處理。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中，所述反應的溫度為20℃～25℃，所述反應的時間為10～20min。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：步驟1)中，所述NaOH水溶液的摩爾濃度為6mol/L，所述NaOH水溶液與所述待測的小牛血清去蛋白注射液的體積比可為1：1；

在水浴的條件下進行煮制；所述煮制的溫度為59～61℃，時間為35～45min。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于：步驟2)中，所述活性炭的質量加入量為所述待測的小牛血清去蛋白注射液質量的1.8％～2.0％。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于：步驟3)中，所述微孔膜的孔徑為0.22μm。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于：步驟4)中，所述固相萃取的固體吸附劑為C18。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于：所述熒光共振能量轉移探針中，所述β-環糊精修飾的ZnS量子點的摩爾濃度可為5.0×10^-5～7.5×10^-5mol/L，具體可為5.0×10^-5mol/L，所述三羥基黃酮的摩爾濃度可為1.0×10^-6～2.5×10^-6mol/L，具體可為2.5×10^-6mol/L；

所述β-環糊精修飾的ZnS量子點與所述三羥基黃酮的摩爾比為20：1。