[發(fā)明專利]一種檢測皮膚癌相關標志物的探針組合及其試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510732616.2
• 申請日: 2015-10-30
• 公開（公告）號: CN106636308B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發(fā)明（設計）人: 劉蘇燕;吳詩揚;董艷
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

本發(fā)明屬于分子生物學領域，涉及醫(yī)學和生物技術，具體的是涉及一種檢測皮膚癌相關標志物的探針組合及其試劑盒。本發(fā)明提供的皮膚癌相關的標志物選自12種miRNA，所述標志物與皮膚癌密切相關；本發(fā)明提供所探針組合物包括捕獲探針和信號放大組合物，所述的探針組合物特異性、準確度、靈敏度皆良好，能夠實現(xiàn)對目標標志物的準確檢測，且重復性好。本發(fā)明提供的試劑盒還包括信號放大探針，本發(fā)明提供的方法采用原位雜交方法，通過級聯(lián)放大體系提高信號強度，采用本發(fā)明提供的試劑盒和方法能夠在8h內完成對樣品的檢測，提高了檢測效率。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學領域，涉及醫(yī)學和生物技術，具體的是涉及一種檢測皮膚癌相關標志物的探針組合及其試劑盒。

背景技術

MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內源性的具有調控功能的非編碼RNA，其大小長約20～25個核苷酸。成熟的miRNAs是由較長的初級轉錄物經過一系列核酸酶的剪切加工而產生的，隨后組裝進RNA誘導的沉默復合體(RNA-induced silencingcomplex,RISC)，通過堿基互補配對的方式識別靶miRNA，并根據互補程度的不同指導沉默復合體降解靶miRNA或者阻遏靶miRNA的翻譯。最近的研究表明miRNA參與各種各樣的調節(jié)途徑，包括發(fā)育、病毒防御、造血過程、器官形成、細胞增殖和凋亡、脂肪代謝等等。

皮膚癌包括鱗狀細胞癌、基底細胞癌、惡性黑色素瘤、惡性淋巴瘤、特發(fā)性出血性肉瘤、汗腺癌、隆突性皮膚纖維肉瘤、血管肉瘤等。其中常見的是鱗狀細胞癌和基底細胞癌。目前，研究結果表明，多種miRNA在皮膚癌細胞或臨床樣本中呈過表達或下調表達，且發(fā)現(xiàn)有些miRNA能夠誘導形成皮下腫瘤。基于miRNA的表達與皮膚癌的相關性，miRNA可以作為皮膚癌相關的標志物，通過對miRNA表達的檢測，實現(xiàn)對皮膚癌的早期診斷和治療。

目前，針對miRNA的檢測方法主要有Northern Blot、基因芯片、熒光定量探針法、基于微球的流式細胞術技術。但NorthernBlot方法敏感度低、耗時長且RNA的用量較大，不適合高通量分析；基因芯片技術能實現(xiàn)miRNA的高通量分析，即在一塊芯片上同時檢測多個miRNA，但缺點是結果準確性低，重復性差，實驗價格昂貴；熒光定量探針法檢測靈敏度高，但檢測費用昂貴；而基于微球的流式細胞術技術將探針固定于微球上并置于液相中，更有利于捕獲miRNA序列，因此提高了準確性，但是由于miRNA同源性高，長度較短，細胞或組織內含量低，針對它的高靈敏高選擇性檢測方法仍然有待進一步完善。

原位雜交技術是一種定位和形態(tài)學檢測保存的組織切片或細胞制備物中特異性miRNA序列的方法。然而目前現(xiàn)有技術中對miRNA的多重平行檢測仍存在許多困難。首先，需要分別制備各靶miRNA的標記探針；其次，難以同時原位檢測多種靶miRNA的表達。因此，目前報道的對多種miRNA的檢測只能用不同的標記方法，然而，用不同的標記方法不能很好地控制探針與細胞中非特異性序列可能的交叉雜交。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種特異性強、靈敏度高的皮膚癌相關microRNA檢測試劑盒。

實現(xiàn)上述目的的技術方案如下。

一種探針組合物，其特征在于，所述探針組合物能夠檢測皮膚癌相關標志物，所述標志物選自hsa-miR-375、hsa-miR-149-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-199a-5p、hsa-miR-137、hsa-miR-182-5p、hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-31-5p、hsa-miR-21-5p或hsa-miR-365a-3p中一種或以上。

所述探針組合物，其特征在于，包括捕獲探針：

所述捕獲探針的核苷酸序列自5’端至3’端依次為P1序列、間隔臂序列、P2序列；

所述P1序列與權利要求1所述的標志物特異性結合；