[發明專利]檢測轉基因玉米T4-1-1外源基因純合/雜合狀態的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201510728614.6
• 申請日: 2015-10-30
• 公開（公告）號: CN105274229A
• 公開（公告）日: 2016-01-27
• 發明（設計）人: 張維;周正富;余桂容;郭翠;徐利遠;林敏
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

1.一種用于檢測轉基因玉米T4-1-1外源基因純合/雜合狀態的PCR檢測引物對，其核苷酸序列分別為SEQIDNo.1、SEQIDNo.2所示。

2.一種用于測定轉基因玉米T4-1-1外源基因插入的純合/雜合狀態的PCR檢測試劑盒，其特征是包括有權利要求1所述的PCR檢測引物對。

3.一種檢測轉基因玉米T4-1-1外源基因插入的純合/雜合狀態的方法，其步驟為：

(1)提取待檢測水稻樣品的DNA；

(2)以上述提取的DNA為模板，以SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的核苷酸序列為引物，建立PCR擴增體系，并進行PCR擴增；

(3)根據擴增出的DNA片段，確定外源基因插入的純合/雜合狀態：

如果僅擴增出一條SEQIDNo.3所示核苷酸序列的片段，鑒定為純合轉基因玉米T4-1-1；

如果擴增出分別為SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示核苷酸序列的兩條片段，鑒定為雜合轉基因玉米T4-1-1；

如果僅擴增出一條SEQIDNo.4所示核苷酸序列的片段，鑒定為不是轉基因玉米T4-1-1。

4.權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴增體系按照以下方式建立：反應體系的總體積為25.0μL，其中，10×LATaqBufferII(Mg²⁺Plus)緩沖液2.5μL，TaKaRaLATaq(5U/μl)聚合酶0.20μL，dNTPMixture(2.5mMeach)4.0μL，10μmol/LSEQIDNo.1所示的引物1μL，10μmol/LSEQIDNo.2所示的引物1μL，25ng/μLDNA模板2μL，余量為雙蒸水。

5.權利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴增條件為：94℃變性1min；(94℃，20s，65℃，5min)30個循環；72℃延伸5min。

6.SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示序列的核苷酸在制備檢測轉基因玉米T4-1-1外源基因插入的純合/雜合狀態的PCR檢測試劑中的應用。

7.SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示序列的核苷酸在檢測轉基因玉米T4-1-1外源基因插入的純合/雜合狀態中的應用。

8.SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示序列的核苷酸在檢測轉基因玉米T4-1-1外源基因插入的純合/雜合狀態中的應用。