[發明專利]大腸桿菌噬菌體M13內標質控品的制備、應用和試劑盒有效
| 申請號： | 201510727226.6 | 申請日： | 2015-10-29 |
| 公開（公告）號： | CN105219737A | 公開（公告）日： | 2016-01-06 |
| 發明（設計）人： | 崔紅;李哲群;商興芳;吳秋保;曾家琨 | 申請（專利權）人： | 廣州呼研所生物技術有限公司;廣東和信健康科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N7/00 | 分類號： | C12N7/00;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/92 |
| 代理公司： | 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224 | 代理人： | 林青中;萬志香 |
| 地址： | 510530 廣東省廣州市廣州高新技術產業*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 大腸桿菌噬菌體 m13 內標質控品 制備 應用 試劑盒 | ||
1.一種大腸桿菌噬菌體M13內標質控品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)宿主菌的制備：挑大腸桿菌ER2738菌種接種在固體培養基上培養；再挑取單菌落接種至液體培養基中，擴大培養，得到含宿主菌的培養液；
(2)噬菌體M13單克隆的制備：挑噬菌體M13用雙層瓊脂平板培養法培養18-24小時，再挑取單個噬菌斑至含宿主菌的液體培養基中培養20-24h，得到含噬菌體M13的培養液；
(3)噬菌體M13的擴大培養：將步驟(1)制備的含宿主菌的培養液接種到液體培養基中，培養4-5小時，得到細菌培養液，再將步驟(2)制備的含噬菌體M13的培養液接種到細菌培養液中，培養過夜，取培養液離心，收集上清液，過濾即得到純化的噬菌體M13懸液；
(4)噬菌體M13的分析檢測：取步驟(3)制備的噬菌體M13用熒光PCR法檢測Ct值，并用雙層瓊脂法測效價；
(5)噬菌體M13內標質控品的制備：用凍干稀釋液將噬菌體M13懸液稀釋至Ct值為18-20，分裝于離心管中，真空冷凍干燥，所得凍干品冷凍保存。
2.根據權利要求1所述的大腸桿菌噬菌體M13內標質控品的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述熒光PCR法檢測Ct值針對噬菌體M13的擴增引物為SEQIDNO:4和SEQIDNO:5。
3.根據權利要求1所述的大腸桿菌噬菌體M13內標質控品的制備方法，其特征在于，步驟(4)所述熒光PCR法檢測Ct值針對噬菌體M13的探針為SEQIDNO:6。
4.根據權利要求1-3任一項所述的大腸桿菌噬菌體M13內標質控品的制備方法，其特征在于，步驟(5)所述凍干稀釋液為含有質量分數為0.8-1.2％的牛血清白蛋白和體積分數為45-55％的吐溫20的水溶液。
5.根據權利要求1-3任一項所述的大腸桿菌噬菌體M13內標質控品的制備方法，其特征在于，步驟(5)所述真空冷凍干燥的溫度為-50℃，壓力為0.2mTorr，所述冷凍保存的溫度為-20℃。
6.一種大腸桿菌噬菌體M13內標質控品，其特征在于，由權利要求1-5任一項所述的制備方法制備而成。
7.權利要求6所述的大腸桿菌噬菌體M13內標質控品在DNA病原體的熒光PCR檢測過程中作為內標質控品的的應用。
8.一種DNA病原體熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，包含檢測試劑和內標質控品，所述內標質控品為權利要求6所述的大腸桿菌噬菌體M13內標質控品。
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