[發(fā)明專利]一種胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液及凍存方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510718538.0
• 申請日: 2015-10-28
• 公開（公告）號: CN105165803A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;麥錦連;李平
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州賽萊拉干細(xì)胞科技股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

1.一種胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液，包括

DMSO10v/v％-20v/v％

胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基30v/v％-80v/v％

胎牛血清10v/v％-50v/v％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍存保護(hù)液，所述胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法為：取P1-P5代的胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞酶解消化后傳代，連續(xù)培養(yǎng)24-72h后，收集培養(yǎng)上清，離心后取上清。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍存保護(hù)液，所述胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法中所述酶解消化具體為向細(xì)胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²的0.05％-0.3％的胰酶和0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，完全培養(yǎng)基終止酶解。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍存保護(hù)液，所述胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法中所述傳代為酶解消化后的細(xì)胞離心，完全培養(yǎng)基重選后，按80000個(gè)細(xì)胞/cm²-15000個(gè)細(xì)胞/cm²的傳代密度傳代，細(xì)胞連續(xù)生長24h-72h。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的凍存保護(hù)液，所述胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基的制備方法中所述離心為200g-400g離心5min。

6.權(quán)利要求1所述胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液的制備方法，按比例將胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基與胎牛血清混合，然后加入DMSO，冰水浴中降溫至0℃。

7.一種胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存方法，將胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞消化離心后，加入胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基，調(diào)整細(xì)胞密度至0.1×10⁶個(gè)/mL-10×10⁶個(gè)/mL，加入等體積的權(quán)利要求1所述胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液，混勻后，分裝至凍存管中，-80℃中凍存1天-5天，轉(zhuǎn)移至液氮中長久保存。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的凍存方法，所述消化為向細(xì)胞中加入0.015mL/cm²-0.04mL/cm²的0.05％-0.3％的胰酶和0.01％-0.04％EDTA消化1min-3min，用5倍-10倍于消化液的完全培養(yǎng)基終止酶解。

9.一種胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存試劑盒，包含權(quán)利要求1所述胎盤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存保護(hù)液。