[發(fā)明專利]一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽及其制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201510718114.4 | 申請日： | 2015-10-29 |
| 公開（公告）號： | CN105601708B | 公開（公告）日： | 2018-12-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 趙鐘興;陶萌良;呂汶駿;廖丹葵;孫建華;雷敬玲;王朝陽;王欣輝;謝美萱 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西大學 |
| 主分類號： | C07K7/06 | 分類號： | C07K7/06;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/08;A61P9/12;A23L33/18 |
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| 地址： | 530004 廣西壯族*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 蠶蛹 蛋白 血管 緊張 轉(zhuǎn)換 抑制 多肽 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽及其制備方法和應(yīng)用。一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽，其是從蠶蛹蛋白水解液中分離得到的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制多肽具有結(jié)構(gòu)新穎，分子量小，降血壓活性高等特點，為治療高血壓的食品、藥物和保健品的開發(fā)利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angotensin Converting Enzyme，ACE)是一種存在于不同組織里的多功能胞外含鋅二羧肽酶，能被氯離子激活并具有較寬的底物特異性。它在腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renial Angiotensin System，RAS)和激肽酶-激肽系統(tǒng)(Kallikrein-Kinin，KKS)具有重要和關(guān)鍵的生理功能。它的主要作用是把血管緊張素I(Angiotensin IConverting Enzyme)轉(zhuǎn)化成血管緊張素II(Angiotensin II Converting Enzyme)，同時還會使血管舒緩激肽失活，最終導致人體血壓升高。
血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽是由數(shù)個氨基酸組成具有生物活性的多肽，并且對ACE活性區(qū)域具有較強親和力的抑制劑，它們與ACE的親和力比血管緊張素I或舒緩激肽更強，而且也較不容易從ACE結(jié)合區(qū)釋放，降低ACE活性或使其失去活性，從而阻礙ACE催化血管緊張素I轉(zhuǎn)化成血管緊張素II，以及阻礙ACE水解舒緩激肽成為失活片段，從而達到降低血壓的作用。
公開于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當被視為承認或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽，其從蠶蛹蛋白的水解產(chǎn)物中提取得到，其具有明顯的ACE抑制活性，為制備降血壓藥物提供理論指導。
本發(fā)明提供了一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示。
本發(fā)明還提供了所述的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽的制備方法，包括如下步驟：
(1)將冷凍蠶蛹按照1:3的比例加入到蒸餾水中，勻漿攪拌1h后過濾，重復(fù)3次；合并濾液，濾液在100℃水浴條件下加熱30min至蛋白變性，再調(diào)節(jié)pH為3.0使蛋白沉降，蛋白溶液在4℃條件下靜置12h，使蛋白充分沉淀與溶液分層，隨后高速冷凍離心4℃、8000r/min離心45min去除上清液，收集沉淀，干燥，即得到蠶蛹粗蛋白粉；
(2)將蠶蛹粗蛋白粉按照質(zhì)量比1:50加入到蒸餾水中，完全溶解，然后加入1.5％的中性蛋白酶，在pH為7.0，溫度為50℃條件下進行酶解，酶解時間為3h；酶解完成后在90℃水浴滅活10min，水解液離心后取上清液；用截留分子量為5KDa超濾膜過濾，將超濾透過液冷凍干燥，得到凍干粉末；
(3)將步驟(2)中得到的凍干粉末溶解在濃度為0.01mol/L，pH為8.5的磷酸鹽緩沖液中；以1.0mL/min的速度上樣于平衡好的陰離子交換樹脂色譜柱，用磷酸鹽緩沖液洗柱至在220nm處吸收峰回到基線，洗脫流速為1.0mL/min；用NaCl溶液對樣品進行梯度洗脫，洗脫流速為1.0mL/min，洗脫梯度為0-1.0mg/mL；按照時間段收集各個組分進行冷凍干燥并檢測活性，在-20℃條件下保存；
(4)將步驟(3)中活性最好的凍干粉末上樣于平衡好的Sephadex G-15凝膠色譜柱，以水為流動相進行洗脫，洗脫流速為1.0mL/min；檢測波長為280nm；按照時間段收集各個組分進行冷凍干燥并檢測活性，在-20℃條件下保存；
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