[發(fā)明專利]一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510718114.4
• 申請(qǐng)日: 2015-10-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105601708B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙鐘興;陶萌良;呂汶駿;廖丹葵;孫建華;雷敬玲;王朝陽(yáng);王欣輝;謝美萱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/08;A61P9/12;A23L33/18
• 代理公司: 北京中譽(yù)威圣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11279
• 代理人: 王正茂

1.一種蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，其特征在于，所述的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽的制備方法，包括如下步驟：

(1)將冷凍蠶蛹按照1:3的比例加入到蒸餾水中，勻漿攪拌1h后過(guò)濾，重復(fù)3次；合并濾液，濾液在100℃水浴條件下加熱30min至蛋白變性，再調(diào)節(jié)pH為3.0使蛋白沉降，蛋白溶液在4℃條件下靜置12h，使蛋白充分沉淀與溶液分層，隨后高速冷凍離心4℃、8000r/min離心45min去除上清液，收集沉淀，干燥，即得到蠶蛹粗蛋白粉；

(2)將蠶蛹粗蛋白粉按照質(zhì)量比1:50加入到蒸餾水中，完全溶解，然后加入1.5％的中性蛋白酶，在pH為7.0，溫度為50℃條件下進(jìn)行酶解，酶解時(shí)間為3h；酶解完成后在90℃水浴滅活10min，水解液離心后取上清液；用截留分子量為5KDa超濾膜過(guò)濾，將超濾透過(guò)液冷凍干燥，得到凍干粉末；

(3)將步驟(2)中得到的凍干粉末溶解在濃度為0.01mol/L，pH為8.5的磷酸鹽緩沖液中；以1.0mL/min的速度上樣于平衡好的陰離子交換樹(shù)脂色譜柱，用磷酸鹽緩沖液洗柱至在220nm處吸收峰回到基線，洗脫流速為1.0mL/min；用NaCl溶液對(duì)樣品進(jìn)行梯度洗脫，洗脫流速為1.0mL/min，洗脫梯度為0-1.0mg/mL；按照時(shí)間段收集各個(gè)組分進(jìn)行冷凍干燥并檢測(cè)活性，在-20℃條件下保存；

(4)將步驟(3)中活性最好的凍干粉末上樣于平衡好的Sephadex G-15凝膠色譜柱，以水為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，洗脫流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；按照時(shí)間段收集各個(gè)組分進(jìn)行冷凍干燥并檢測(cè)活性，在-20℃條件下保存；

(5)將步驟(4)中活性最好的凍干粉末溶解在超純水中，進(jìn)行反相高效液相色譜分離，流動(dòng)相，A相：含0.1％三氟乙酸的純水；B相：乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，分段收集各個(gè)組分進(jìn)行冷凍干燥并檢測(cè)活性，在-20℃條件下保存；

(6)將步驟(5)得到的活性最好的凍干粉末再次經(jīng)過(guò)反相高效液相色譜分離，流動(dòng)相，A相：含0.1％三氟乙酸的純水；B相：乙腈；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，收集保留時(shí)間為19.0-21.5min的組分進(jìn)行冷凍干燥，即得血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽。

2.根據(jù)要求1所述的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽，其特征在于：步驟(5)中所述的乙腈進(jìn)行梯度洗脫，其濃度在0-60min時(shí)間內(nèi)從5％上升為30％。

3.根據(jù)要求1所述的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽，其特征在于：步驟(6)中所述的乙腈的濃度為7％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽在制備降血壓藥物中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽在制備食品中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蠶蛹蛋白源血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制多肽在制備保健品中的應(yīng)用。