[發明專利]基于AgNCs/HpDNA探針的microRNA SDA檢測用SDA反應液

有效

• 申請號: 201510705114.0
• 申請日: 2015-10-26
• 公開（公告）號: CN105274227B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 崔大祥;張晶璞
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 徐紅銀;郭國中

本發明公開了一種基于AgNCs/HpDNA探針的microRNA SDA檢測用SDA反應液；本發明利用發夾型DNA模板合成銀納米團簇，并將其作為新型分子信標，在引物垂懸端富G序列介導的鏈取代等溫擴增反應中，借助雜交產生的富G熒光增強效應，實現對胃癌血漿microRNA標志物的單個檢測；特異性高、反應時間短、用料少、操作步驟簡便，為建立快速簡便的新型microRNA檢測方法開辟了新方向。

技術領域

本發明涉及醫學和分子診斷領域，是一種基于AgNCs/HpDNA探針的microRNA SDA檢測法，特別是涉及一種基于發夾型DNA模板合成銀納米團簇探針結合鏈取代等溫擴增的單個microRNA檢測方法。

背景技術

MicroRNA(miRNA)是一類長度約為21nt的內源非編碼小RNA分子，其可通過與mRNA之間精確或非精確互補配對，參與調控mRNA的表達水平。多個miRNA可協同調控一個mRNA，或一個miRNA也可同時影響多個靶基因，從而形成一個高度復雜的調控網絡，影響著從分子到細胞再到組織水平的一系列生物功能。miRNA表達異常與疾病及癌癥發生密切相關。尤為重要的是，已發現多種miRNA標志物可用于癌癥早期診斷、預后及進程監控。其中，上海交通大學崔大祥課題組用微陣列芯片miRNA全基因組掃描結合qRT-PCR技術篩選得到miR-16-5p和miR-19b-3p兩種血漿miRNA標志物，并指出二者可用于指示胃癌發生發展進程(Zhang,J.,Song,Y.,Zhang,C.,et al.(2015)Circulating miR-16-5p and miR-19b-3p as twonovel potential biomarkers to indicate progression ofgastriccancer.Theranostics,5,733-745.)。其中，qRT-PCR是進行miRNA定量檢測的金標準，但由于其需分步進行逆轉錄和熱循環擴增及檢測，導致該法耗時且費力。所以仍有必要進一步發展便捷快速的miRNA檢測新方法。

等溫擴增技術的出現使核酸擴增技術因擺脫了熱循環變性步驟和儀器的束縛，而受到了眾多研究者的關注。作為第一代等溫擴增技術，鏈取代擴增Strand-displacementamplification(SDA)受DNA修復中堿基切除修復機制的啟發迅速發展起來，至今，已發展出包括多引物SDA(multiply primed SDA)，剪切誘導SDA(nicking-initiated SDA)，環介導等溫擴增(loop-mediated isothermal amplification(LAMP))和結構轉換誘發SDA(structure-switching-triggered SDA)等多種亞型。其中，由于結構轉換誘發SDA不需要特殊設計剪切位點和額外使用剪切酶，而僅通過待測靶核酸與發夾結構探針的結合并導致后者打開而誘導SDA反應，特別適合對短鏈核酸分子及miRNA進行檢測。目前，常用于結構轉換誘發SDA的檢測探針是一端連接有熒光染料及另一端連接熒光淬滅子的發夾型DNA分子信標(molecular beacon(MB))，但由于其需要對DNA進行偶聯修飾，使檢測成本增高，檢測應用受限。