[發明專利]基于AgNCs/HpDNA探針的microRNA SDA檢測用SDA反應液

有效

• 申請號: 201510705114.0
• 申請日: 2015-10-26
• 公開（公告）號: CN105274227B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 崔大祥;張晶璞
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 徐紅銀;郭國中

1.一種HpDNA，其特征在于，所述HpDNA的序列如SEQ ID NO：1所示；所述HpDNA含三個區，分別為頸區HpS、環區HpL和3’垂懸區HpRO；其中，垂懸區富含C序列用于合成AgNCs，且HpRO在雜交作用下與互補鏈中的富G垂懸序列靠近而得到紅色熒光增強信號；HpRO序列為5’-CCCTTAATCCCC-3’。

2.一種基于權利要求1所述HpDNA的AgNCs/HpDNA，其特征在于，所述AgNCs/HpDNA通過如下方法制備：

將AgNO₃溶液、NaBH₄溶液加入HpDNA中，震蕩，靜置，即得AgNCs/HpDNA。

3.根據權利要求2所述的AgNCs/HpDNA，其特征在于，所述HpDNA、AgNO₃、NaBH₄的終摩爾濃度之比為1:25:25；

所述震蕩的時間為45s-1min；

所述靜置具體指于暗環境中室溫放置18h。

4.根據權利要求2所述的AgNCs/HpDNA在制備檢測胃癌血漿miRNA標志物miR-16-5p用SDA反應液中的應用，所述miR-16-5p的序列如SEQ ID NO：2所示。

5.一種基于權利要求2所述AgNCs/HpDNA的胃癌血漿miRNA標志物miR-16-5p SDA檢測用SDA反應液，其特征在于，

所述SDA反應液的總體積為50μL，其中，

所述引物的序列由兩個區域組成，分別為頸區互補區PRSc和富G序列垂懸區PO，其序列如SEQ ID NO：3所示；所述頸區互補區序列為5’-TA-3’；所述富G序列垂懸區序列為5’-GGGTGGGGTGGGGTGGGG-3’；

所述緩沖液1×Nb2.1包括50mM NaAc、10mM Tris-HAc、10mM Mg(Ac)₂和100μg/mLBSA，緩沖液pH 7.9；

所述檢測包括：以所述AgNCs/HpDNA為分子探針，在含富G序列垂懸端的上述引物作用下進行SDA反應，借助富G序列雜交熒光增強效應，在580nm波長激發下，實現miR-16-5p檢測。