[發明專利]一種基因分型檢測方法

在審

• 申請號: 201510698148.1
• 申請日: 2015-10-23
• 公開（公告）號: CN105219864A
• 公開（公告）日: 2016-01-06
• 發明（設計）人: 張明
• 申請（專利權）人: 張明
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳新創友知識產權代理有限公司 44223
• 代理人: 劉莉

1.一種基因分型檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將待測基因加入PCR反應液中形成混合液并封閉在PCR反應板上進行PCR擴增反應，所述PCR反應液中包含待測基因的擴增引物和特異性探針、以及內參照引物和內參照探針，所述特異性探針和所述內參照探針的5’端用熒光基團標記且3’端用淬滅基團標記，在所述PCR擴增反應前讀取所述混合液的本底熒光值，在PCR擴增反應結束后讀取反應后的熒光值；

(2)將所述反應后的熒光值減去所述本底熒光值，若增值大于等于90％，則判定所述待測基因為陽性，若增值小于90％則判定所述待測基因為陰性。

2.如權利要求1所述的基因分型檢測方法，其特征在于：所述PCR擴增反應采用不對稱擴增。

3.如權利要求1所述的基因分型檢測方法，其特征在于：各個所述特異性探針上的熒光基團以及所述內參照探針上的熒光基團均不同；所述熒光基團從以下群組中選擇：FAM、HEX、TET、ROX、TAMRA和CY5；所述淬滅基團為Dabcyl。

4.如權利要求1-3任意一項所述的基因分型檢測方法，其特征在于：所述待測基因為ABO基因的O1、O2、B、A、A2基因型，所述擴增引物為通用于所述O1、O2、B、A、A2基因的引物，序列如下：

GF：5’-ATATATATGGCAAACACAGTTAACCCAATG-3’

GR：5’-CCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTC-3’；

所述內參照引物的序列為：

IF：5’-CAGTGCCTTCCCAACCATTCCCTTA-3’

IR：5’-ATCCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTC-3’；

所述O1、O2、B、A、A2基因的特異性探針以及所述內參照探針分別如下：

PO1：5’FAM-TAAGTGGAAGGATGTCCTCGTCGTG-Dabcyl3’

PO2：5’HEX-AGTGGACGTGGACATGGAGTTCC-Dabcyl3’

PB：5’TET-AGTGGACGTGGACATGGAGTTCC-Dabcyl3’

PA：5’TAMRA-CCGACCCCCCGAAGAGCC-Dabcyl3’

PA2：5’ROX-TGCCTTCCCAACCATTCCCTTA-Dabcyl3’

PI：5’CY5-CAGGCAGTACCCGTTCAAGC-Dabcyl3’。

5.如權利要求1-3任意一項所述的基因分型檢測方法，其特征在于：所述待測基因為HLA-B27基因，所述擴增引物的序列如下：

SF：5’-GATCAGGACGAAGTCCCAGGCC-3’

SR：5’-CATCTCGGCGTCTGAGGAGA-3’；

所述內參照引物的序列為：

IF：5’-CAGTGCCTTCCCAACCATTCCCTTA-3’

IR：5’-ATCCACTCACGGATTTCTGTTGTGTTTC-3’；

所述HLA-B27基因的特異性探針以及所述內參照探針分別如下：

PS：5’FAM-TGTCGGGTCCTTGTTCCAGGAT-Dabcyl3’

PI：5’HEX-CCCACATCAGGTACAGGCTT-Dabcyl3’。

6.如權利要求4所述的基因分型檢測方法，其特征在于：所述PCR反應液中還包括緩沖液、熱啟動酶、dNTP、水和氯化鎂，所述PCR擴增反應的程序如下：96℃預變性15分鐘；95℃變性15秒，65℃復性20秒，72℃延伸20秒，循環30次；72℃再延伸5分鐘。

7.如權利要求5所述的基因分型檢測方法，其特征在于：所述PCR反應液中還包括緩沖液、熱啟動酶、dNTP、水和氯化鎂，所述PCR擴增反應的程序如下：96℃預變性15分鐘；95℃變性15秒，55℃復性20秒，72℃延伸20秒，循環30次；72℃再延伸5分鐘。