[發明專利]一種藥用野生稻基因OobZIP2及其表達載體和構建方法

有效

• 申請號: 201510697458.1
• 申請日: 2015-10-21
• 公開（公告）號: CN105177021B
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 陳志雄;戴雙鳳;劉向東;譚碧蘭;謝海媚;夏昌選
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/66;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 陳軒

本發明提供一種藥用野生稻基因OobZIP2及其表達載體和構建方法，具體地，該藥用野生稻基因OobZIP2的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，該基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID No.16所示。該野生稻基因OobZIP2具有完整CDS區，且上調基因表達顯著，它們屬于bZIP家庭的G亞族；該OobZIP2具有轉錄激活活性；該OobZIP2獲得的轉基因植株中OobZIP2表達量顯著增高，具有抗鹽和抗旱的抗逆性。

技術領域

本發明涉及水稻基因工程領域，具體涉及一種藥用野生稻基因OobZIP2及其表達載體和構建方法。

背景技術

水稻是世界上最重要的糧食作物之一，也是我國的第一大糧食作物。非生物脅迫如干旱等會嚴重影響水稻的生長發育及產量。

在稻屬(Oryza)中，僅有亞洲栽培稻(O.sativa L.)和非洲栽培稻(O.glaberrimaSteud)2個為栽培種，其余20余種均為野生稻，由于長期在野生狀態下生長，經過抵御病蟲害的侵襲和不良環境的自然選擇，野生稻蘊含了大量的優良基因，是一個天然的基因寶庫(鄂志國等，遺傳，2008(11):1397-1405.，2008)。但因其與栽培稻(AA染色體組)之間存在嚴重的生殖障礙，其有利性狀目前未得以高效利用。

bZIP(Basic Leucin zipper)轉錄因子即堿性亮氨酸拉鏈蛋白，它廣泛存在于動物、植物、微生物當中，是一類結構較為保守的轉錄調控因子。目前，水稻bZIP轉錄因子家族成員中，有OoABI5(Zou et al.,2008)、OsbZIP23(Xiang et al.,2008)、OsbZIP72(Lu etal.,2009)、OoABF1(Hossain et al.,2010)、OoABF2(Hossain et al.,2010)、OsbZIP60(喻旭等，2011)、OsbZIP46(Tang et al.,2012)、OsbZIP39(Takahashi et al.,2012)、OsbZIP52(Liu et al.,2012)、OsbZIP58(Wang et al.,2013)、OsbZIP71(Liu et al.,2014)等被成功克隆，且對干旱、高鹽、高溫、低溫以及其他生物脅迫表現出良好的抗性。因此，針對藥用野生稻中bZIP轉錄因子家族基因的研究，以及將有利性狀的基因介導入栽培稻，對獲得具有優良性狀的栽培稻植株具有重要意義。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種與栽培稻具有較高同源性、能有效提高抗逆性的藥用野生稻基因OobZIP2。

為解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種藥用野生稻基因OobZIP2，該基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

作為優選，上述的藥用野生稻基因OobZIP2，通過以下步驟制得：

1)提取藥用野生稻RNA；

2)合成cDNA第一鏈；

3)PCR擴增：以cDNA第一鏈為模板，采用如SEQ ID No.2所示的上游引物以及如SEQID No.3所示的下游引物，進行PCR擴增，獲得目的基因條帶，電泳切膠回收。

作為優選，上述藥用野生稻基因OobZIP2，所述步驟3)中，采用50μL反應體系：10×PCR Buffer for KOD-Plus-Neo 5μL；2mM dNTPs 5μL；25mM MgSO₄ 3μL；上游引物(10μM)1.5μL，下游引物(10μM)1.5μL；模板5μL；KOD-Plus-Neo(1U·μL-1)1μL；ddH₂O 28μL；其中所述模板為cDNA第一鏈；

PCR反應程序為：94℃預變性2min；循環(98℃，10sec；68℃，1min)40次；最后72℃延伸5min。