[發明專利]一種檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201510694787.0
• 申請日: 2015-10-23
• 公開（公告）號: CN106610426A
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發明（設計）人: 杜霞;洪霞;劉靜
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，包括酶標板、乙草胺標準品、乙草胺抗體工作液、乙草胺酶標二抗工作液、底物液A、底物液B、終止液、濃縮稀釋液和濃縮洗滌液。

2.檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，包括以下步驟：酶標板的制備、乙草胺標準品的制備、乙草胺抗體工作液的制備、乙草胺酶標二抗工作液的制備、底物液A的制備、底物液B的制備、終止液的制備、濃縮稀釋液的制備和濃縮洗滌液的制備。

3.根據權利要求2所述的檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，其特征在于：所述的酶標板制備方法為將乙草胺半抗原與載體蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶聯得到乙草胺包被抗原，用0.05 mol/L pH 9.6的碳酸鹽(CBS)緩沖液作為包被液，將包被抗原稀釋成1：40000比例，100 μL/孔，37℃孵育2 h，取出酶標板甩掉板內液體，加入稀釋后的濃縮洗滌液300 μL/孔，洗板2次，30 s/次，然后加入0.5%牛血清白蛋白(BSA)封閉，150 μL/孔，37℃放置1.5 h，棄去封閉液直接拍干，拍干后的酶標板放置恒溫間(25℃)晾干，抽檢合格后將酶標板真空密封于4℃條件下保存。

4.根據權利要求2所述的檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，其特征在于：乙草胺標準品的濃度分別為0 mg/kg、0.1mg/kg、0.3 mg/kg、0.9 mg/kg、2.7 mg/kg、8.1 mg/kg。

5.根據權利要求2所述的檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，其特征在于：所述的乙草胺抗體工作液是采用乙草胺人工抗原免疫小鼠得到單克隆抗體，用抗體稀釋液稀釋成1：60000比例制備。

6.根據權利要求2所述的一種檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，其特征在于：所述的乙草胺酶標二抗工作液由酶標二抗加稀釋液稀釋成1：2000比例，所述底物液A為含有0.5 mmol/L的過氧化氫脲的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液，所述底物液B為四甲基聯苯二胺的乙醇溶液，所述終止液為2 mol/L的硫酸，所述濃縮稀釋液是10倍濃縮稀釋液，其為0.1 mol/L的PBS，pH值范圍7.0-7.5之間，所述濃縮洗滌液是10倍濃縮洗滌液，其為含0.5% 吐溫-20，0.01 mol/L的PBST，pH值范圍7.0-7.5之間。

7.權利要求2所述的檢測乙草胺的酶聯免疫試劑盒及其檢測方法，基于抗原抗體的間接競爭酶聯免疫反應原理，該方法的特征在于：預處理待測樣品，取包被有乙草胺抗原的酶標板，按序分別加入標準品/樣本、乙草胺酶標二抗工作液、乙草胺抗體工作液各50 μL/孔到對應的微孔中，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25℃避光環境中反應30 min，將孔內液體甩干，用洗滌工作液充分洗滌4~5次，每次間隔10 s，拍干后加入底物液A 50 μL/孔，底物液B 50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15～20 min，加入終止液50 μL/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450 nm處或雙波長450/630 nm檢測，測定每孔吸光度值（請在5 min內讀完數據），以的標準品濃度(ppb)的對數為橫坐標，標準品百分吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線，對照標準曲線計算樣品中乙草胺的含量。