[發明專利]一種茯苓速生菌種及其制備方法

在審

• 申請號: 201510677998.3
• 申請日: 2015-10-20
• 公開（公告）號: CN105385605A
• 公開（公告）日: 2016-03-09
• 發明（設計）人: 肖玉林
• 申請（專利權）人: 肖玉林
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種茯苓速生菌種及其制備方法，其特征在于，茯苓菌種生產工藝中的試管種野生選育，一級種子懸浮培養，二級種子液體培養，三級種子生料木棒發菌培養。

2.根據權利要求1所述的茯苓速生菌種的制備方法，包括如下步驟：

一級培養：在一級培養基中接入茯苓母種，于28－30℃條件下培養96－100小時，得到一級種子液，所述一級培養基的配方以重量百分比的含量計為：土豆20－25%、葡萄糖2－2.5%、磷酸二氫鉀0.2－0.3%、硫酸鎂0.15－0.2%、余量為水、維生素B11－2片/L；

二級培養：將所述一級種子液按培養基體積10－15%的接種量接入到二級培養基中，于28－30℃條件下培養96－100小時，得到所述茯苓種子液，所述二級培養基的配方以重量百分比的含量計為：葡萄糖2－2．5%、紅糖2.5－3%、磷酸二氫鉀0.2－0.3%、硫酸鎂0.15－0.2%、玉米漿2.5－3%、酵母膏2－2.5%、余量為水、維生素B11－2片/L。

3.根據權利要求2所述的茯苓速生菌種的制備方法，其特征在于，步驟302二級液體種接入到三級固體種的發菌條件為：無菌接種二級液體種；接種量為30－40%，培育溫度為28－30℃，培育時間為4-6天，菌絲長滿料面。

4.根據權利要求2所述的茯苓速生菌種的制備方法，其特征在于：

選用新鮮、干燥的松段木，其標準：長15-18mm、直徑6-8mm，經太陽暴曬干燥后，要求嚴格滅菌、消毒，在無菌室無菌接種二級液體種；按步驟303接種量為30－40%，培育溫度為28－30℃，培育時間為4-6天，菌絲長滿料面，得茯苓速生菌種。

5.根據權利要求2所述的茯苓速生菌種的制備方法，包括如下步驟：

茯苓速生菌種的菌株選擇和培養：根據生物遺傳、變異、選育新品種的基本原理和地域環境要求，針對性地遴選茯苓速生菌種的菌株，從中選育出茯苓速生菌種的優良品種；選擇選擇苓體均勻結實、色紅、苓皮薄、香氣濃郁、質量好的野生茯苓，在24-28℃條件下進行組織培養，在氣溫24℃-26℃，空氣濕度70%-80%時，用無菌刀拔去茯苓表皮，取一小片實體，分離菌核和菌絲進行培養，得母種。

6.根據權利要求3所述的選育方法，其特征在于；

所述菌絲體的培養、提純、復壯培養基的組成為馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖15g、紅糖15g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.75g、維生素B11g,,蛋白胨5g、水1000mi（松木屑汁），其制備方法：包括下述步驟：（1）將馬鈴薯去皮，清選干凈，切成薄片，放入鍋中煮沸，煮到熟而不爛的程度，篩網過濾，制得馬鈴薯汁，調節其pH值5.5-6.5；（2）在制得的馬鈴薯汁中加入培養基組成中的其它成份，加熱溶解后，分裝入試管后，在0.15公斤壓力下高溫滅菌30分鐘，取出，冷卻，將其制成斜面培養基，在無菌條件下接入茯苓母種；得提純母種。

7.根據權利要求4所述的茯苓速生菌種培養方法，其特征在于；

所得茯苓速生菌種提純種，將其制作成液體菌種，包括如下步驟：在培養液中接入茯苓母種，于28－30℃條件下培養96－100小時，得到一級種子液，所述一級培養基的配方以重量百分含量計為：馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀1.5g、硫酸鎂0.75g、維生素B10.75g,,蛋白胨5g、水1000mi，得液體種。

8.根據權利要求5所述的茯苓速生菌種培養方法所得茯苓速生菌種液體種，其特征在于，所述方法、包括如下步驟：

（1）一級培養：在液體培養液中接入所述母種，培養7天，作為一級種子液；

（2）二級培養：將所述第一代種子液按培養基體積10％-15％的接種量接入液體培養基中，培養7天，作為二級種子液；

根據權利要求6所述的茯苓速生菌種培養方法所得茯苓速生菌種三級種，其特征在于所述方法、包括如下步驟：

選用新鮮、干燥、無雜質污染的松段木，其標準：長15-18mm、直徑6-8mm，經太陽暴曬干燥后，要求嚴格滅菌、消毒，在無菌室無菌接種二級液體種；接種量為30－40%，培育溫度為28－30℃，培育時間為4-8天，待菌絲長滿后，得茯苓速生菌種。