[發明專利]脫乙酰幾丁質/海藻酸鈉干細胞微囊及其制備和培養方法

有效

• 申請號: 201510675698.1
• 申請日: 2015-10-15
• 公開（公告）號: CN105274084A
• 公開（公告）日: 2016-01-27
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/04;C12N5/0775
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技術領域

本發明屬于微囊化細胞培養技術領域，具體涉及一種脫乙酰幾丁質/海藻酸鈉干細胞微囊及其制備和培養方法。

背景技術

微膠囊本身是一種把分散的固體物質、液滴或氣體包封在一層致密膜中形成的包覆體復合結構，用于包覆的致密膜通常是由天然或合成高分子材料制成。由于其具有上述包覆的微囊按結構，其功能應用中可以將酶、輔酶、蛋白質等生物大分子或動植物細胞包圍在珠狀的微囊里，而小分子的物質、培養基的營養物質可以自由出入半透膜，達到便于催化或培養的目的，所以微囊經常被用于細胞三維培養，即微囊化細胞培養。

微囊化細胞培養中采用微囊的親水性半透膜將細胞包圍在珠狀的微囊里，細胞不會溢出，同時小分子物質及營養物質可以自由出入半透膜；囊內用作為細胞的培養環境，與液體培養相似，能保護細胞少受損傷，故相比其他的微珠載體、支架等常規的三維培養方式細胞生長好、密度高。

目前微囊化細胞培養中，包膜材料最通常采用的是海藻酸鈉/聚賴氨酸微膠囊；其中，海藻酸鈉是屬于從海洋的褐藻中提取的直鏈陰離子多糖，具有良好的生物相容性，并且其分子結構孔隙和穩定性都比較好，所以其在具有力學骨架長期穩定優勢的條件下，非常適合于被用作微囊的半透膜骨架，既具有良好的生物相容性，又能保持良好的通透性。聚賴氨酸是人工合成的陽離子聚合物，在水相中與陰離子海藻酸鈉混合時，兩者的陰、陽離子發生快速反應交聯成厚約20～100μm半透膜的微膠囊。

但是，上述海藻酸鈉/聚賴氨酸微膠囊在用作為藥物緩釋、靶向釋放控制、或者是一些活性成分保護中，基本上能較好地滿足使用的要求。但是在作為干細胞培養載體使用時，海藻酸鈉與聚賴氨酸之間的陰、陽離子化學結合，易被培養液成分破壞而導致包膜破碎，并且還容易引起微囊周纖維化反應。因此微囊內不能形成較好的細胞生長環境，細胞培養擴增效率較低、形成的凝膠珠硬度較高，不利于干細胞的培養。

發明內容

本發明實施的目的在于克服現有海藻酸鈉/聚賴氨酸微膠囊的缺陷，提供一種脫乙酰幾丁質/海藻酸鈉干細胞微囊及其制備和培養方法。

為了實現上述發明目的，本發明實施例的技術方案如下：

一種脫乙酰幾丁質/海藻酸鈉干細胞微囊的制備方法，包括如下步驟：

獲取脫乙酰幾丁質和海藻酸鈉；

將所述海藻酸鈉于水中分散后，再加入待培養的干細胞，制成海藻酸鈉和細胞的混合懸液；

將所述脫乙酰幾丁質用醋酸鹽緩沖液分散，制成脫乙酰幾丁質溶液；

將所述混合懸液加入至所述脫乙酰幾丁質溶液中進行凝聚。

本發明進一步還提出采用上述方法直接制備得到的脫乙酰幾丁質/海藻酸鈉干細胞微囊。

本發明相比海藻酸鈉/聚賴氨酸的微囊包膜，其包膜結構為脫乙酰幾丁質和海藻酸鈉，兩者不僅陰陽離子電性結合，并進一步利用脫乙酰幾丁質的強吸附性，提升結合形成的包膜的強度，可以防止其在培養過程中被降解。并且這兩者之間共同纖維結合形成半透膜骨架，既具有良好的生物相容性，又能保持良好的通透性，還能夠保持一定的融合性，不會形成微囊周纖維化反應；形成的膜結構具有良好的溶脹、縮脹等性能，用于細胞培養時其透性和穩定性上更好一些，能形成較好的細胞生長環境，提升細胞培養擴增的效率。

同時，還提出用上述微囊進行細胞培養的方法，方法過程包括：將羧甲基纖維素/海藻酸鈉干細胞微囊于培養容器中進行大量培養。

本發明的上述培養方法，采用的細胞微囊能具有更良好的溶脹、縮脹等穩定性能，用于細胞培養時其透性和緩沖性上更好一些，能形成較好的細胞生長環境，提升細胞培養擴增的效率。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

本發明實例提出一種脫乙酰幾丁質/海藻酸鈉干細胞微囊的制備方法，步驟包括：

S10，獲取脫乙酰幾丁質和海藻酸鈉；

S20，將海藻酸鈉于水中分散后，再加入待培養的干細胞，制成海藻酸鈉和細胞的混合懸液；

S30，將脫乙酰幾丁質用醋酸鹽緩沖液分散，制成脫乙酰幾丁質溶液；

S40，將海藻酸鈉和細胞的混合懸液加入至脫乙酰幾丁質溶液中，待凝聚后獲取微囊。