[發(fā)明專利]脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊及其制備和培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510675698.1
• 申請(qǐng)日: 2015-10-15
• 公開（公告）號(hào): CN105274084A
• 公開（公告）日: 2016-01-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳愛生再生醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N11/10
• 分類號(hào): C12N11/10;C12N11/04;C12N5/0775
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• 代理人: 暫無信息

1.一種脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

獲取脫乙酰幾丁質(zhì)和海藻酸鈉；

將所述海藻酸鈉于水中分散后，再加入待培養(yǎng)的干細(xì)胞，制成海藻酸鈉和細(xì)胞的混合懸液；

將所述脫乙酰幾丁質(zhì)用醋酸鹽緩沖液分散，制成脫乙酰幾丁質(zhì)溶液；

將所述混合懸液加入至所述脫乙酰幾丁質(zhì)溶液中進(jìn)行凝聚。

2.如權(quán)利要求1所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法，其特征在于，獲取脫乙酰幾丁質(zhì)和海藻酸鈉步驟中，所述脫乙酰幾丁質(zhì)的脫乙酰度為90％以上。

3.如權(quán)利要求1或2所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法，其特征在于，所述混合懸液中干細(xì)胞濃度為0.5～2×10⁷個(gè)/mL；

和/或，所述混合懸液中海藻酸鈉的質(zhì)量體積濃度為0.5～2％。

4.如權(quán)利要求1或2所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法，其特征在于，所述脫乙酰幾丁質(zhì)溶液中脫乙酰幾丁質(zhì)的質(zhì)量體積濃度為0.5～2％；

和/或，所述醋酸鹽緩沖液為pH4.5～5的醋酸-醋酸鈉緩沖液。

5.如權(quán)利要求1或2所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法，其特征在于，所述脫乙酰幾丁質(zhì)溶液中還添加有0.05～0.3mol/L的NaCl。

6.如權(quán)利要求1或2所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法，其特征在于，將所述混合懸液加入至所述脫乙酰幾丁質(zhì)溶液中進(jìn)行凝聚步驟中，采用滴加或者注射的方式進(jìn)行。

7.如權(quán)利要求1或2所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法，其特征在于，將所述混合懸液加入至所述脫乙酰幾丁質(zhì)溶液中進(jìn)行凝聚步驟之后，還包括：

將凝聚后獲得的微囊依次用質(zhì)量體積濃度0.3～0.9％的生理鹽水、不含F(xiàn)BS的α-MEM培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌處理。

8.如權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的制備方法制備的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊。

9.一種權(quán)利要求8所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：

將脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊于培養(yǎng)容器中進(jìn)行大量培養(yǎng)。

10.如權(quán)利要求9所述的脫乙酰幾丁質(zhì)/海藻酸鈉干細(xì)胞微囊的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)過程中于O₂體積濃度21～25％條件下進(jìn)行；

和/或，所述培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基中添加有10～20mmol/L的果糖。