[發明專利]一種Y形DNA組裝結合信號擴增用于汞離子的檢測方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510675257.1
• 申請日: 2016-01-04
• 公開（公告）號: CN105352922B
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發明（設計）人: 陳俊華;莊莉;周順桂
• 申請（專利權）人: 廣東省生態環境與土壤研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司44205
• 代理人: 胡輝,許飛

1.一種超敏汞或銀離子檢測試劑盒，包括核酸序列、緩沖體系、核酸外切酶Ⅲ和雙鏈DNA熒光染料，其特征在于：核酸序列由核酸序列A、B、C、D組成，其中序列A的5’到3’端依次為a區、b區和通用凸出區d；序列B的5’到3’端依次為c區、a*區和通用凸出區d；序列C的5’到3’端依次為b*、c*和通用凸出區d；序列D的5’到3’端依次為d*區和保護序列；a、b、c區分別和a*、b*、c*區序列互補配對，d*區和通用凸出區d互補配對后至少存在一組不配對的T-T對或C-C對；保護序列為不含4個或以上連續的T或C的隨機序列。

2.根據權利要求1所述的超敏汞或銀離子檢測試劑盒，其特征在于：a、b、c區序列的長度獨立為9～21個堿基。

3.根據權利要求1所述的超敏汞或銀離子檢測試劑盒，其特征在于：a、b、c區序列的長度獨立為12～17個堿基。

4.根據權利要求1所述的超敏汞或銀離子檢測試劑盒，其特征在于：d區序列的長度獨立為9～15個堿基。

5.根據權利要求1所述的超敏汞或銀離子檢測試劑盒，其特征在于：序列D的保護序列至少具有6個堿基。

6.根據權利要求1所述的超敏汞或銀離子檢測試劑盒，其特征在于：d*區和通用凸出區d互補配對后存在2～6組不配對的T-T對或C-C對。

7.根據權利要求1所述的超敏汞或銀離子檢測試劑盒，其特征在于：緩沖體系不與待測離子反應生成沉淀。

8.根據權利要求1所述的超敏汞或銀離子檢測試劑盒，其特征在于：雙鏈DNA熒光染料選自SYBR Green I、EB、Gene finder。

9.一種超敏汞或銀離子檢測方法，包括如下步驟：

1)將核酸序列A、B、C于緩沖體系混合，使其相互雜交形成Y形復合體，加入雙鏈DNA熒光染料；

2)在緩沖體系中繼續加入核酸序列D、核酸外切酶Ⅲ和待測樣品，繼續反應；

3)根據反應體系的熒光值變化情況確定汞離子的濃度；

其中，核酸序列A～D的結構如權利要求1～6任意一項所述。