[發明專利]特異性多肽探針修飾的金電極、其制備方法及應用

在審

• 申請號: 201510659916.2
• 申請日: 2015-10-14
• 公開（公告）號: CN105445349A
• 公開（公告）日: 2016-03-30
• 發明（設計）人: 李根喜;趙婧;陳稀嫻;呂赟
• 申請（專利權）人: 上海大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 上海上大專利事務所(普通合伙) 31205
• 代理人: 顧勇華

1.一種特異性多肽探針修飾的金電極，其特征在于該金電極的表面通過金-巰共價鍵的作用自組裝修飾有末端帶有半胱氨酸中段含有肽酰精氨酸脫亞胺酶底物的多肽序列，該多肽的序列為：GRGAGRGAC。

2.一種制備根據權利要求1所述的特異性多肽探針修飾的金電極的方法，其特征在于該方法的具體步驟為：將處理過的金電極置于0.5MH₂SO₄中，在0～1.6V電壓范圍內進行循環伏安掃描，掃速設置為100mV/s，直至達到穩定；金電極用超純水沖洗吹干后，浸沒在含多肽的電極修飾溶液中，4℃下靜置16小時后，再浸沒在1mM巰基己醇水溶液中避光反應1小時，用超純水沖洗，吹干，即得到多肽修飾的金電極；上述的含多肽的電極修飾溶液為20mMpH6.0的HEPES緩沖溶液中含有濃度為50μM的多肽鏈、10mM的TCEP。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述的金電極的處理方法為：分別用3000目、5000目的砂紙上打磨5分鐘之后，用含有粒度分別為1μm、0.3μm、0.05μm的氧化鋁粉末的絲綢織物或麂皮上依次拋光至鏡面，然后在乙醇、超純水中依次超聲5分鐘，用氮氣吹干，然后取濃硫酸和過氧化氫按3：1的體積比組成的混合液即水虎魚溶液滴加到金電極表面反應3分鐘，用超純水沖洗干凈，吹干。

4.一種肽酰精氨酸脫亞胺酶4的電化學檢測方法，采用根據權利要求1所述的特異性多肽探針修飾的金電極作為工作電極，飽和甘汞電極作為參比電極，鉑電極作為對電極，其特征在于該方法的具體步驟為：

a.取精氨酸脫亞氨酶加入到50mMTris-HCl,1mMCaCl₂,pH7.6的酶反應液中形成一系列含精氨酸脫亞氨酶濃度在0.01nM～50nM范圍內的反應體系；將工作電極插入到該反應體系中，在37°C金屬浴中反應2h；

b.將經步驟a處理的工作電極放置于由4.5mL20mMpH6.0HEPES與0.5mL50μM五氨合釕組成的檢測溶液中，利用三電極系統，以循環伏安法（CV）和差分脈沖伏安法（DPV），檢測釕信號，并在濃度0.01nM～50nM范圍內，得到電流與PAD4濃度的線性關系曲線，其線性相關系數為0.997；

c.利用步驟b所得標準曲線法對待測液進行分析檢測,分析精氨酸脫亞氨酶的含量。