[發(fā)明專利]一種檢測酶活性及化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物性能的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510657942.1
• 申請日: 2015-10-12
• 公開（公告）號: CN105277537B
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 泮鋒綱;丁俊杰;施啟堯
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇三聯(lián)生物工程有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 常州市英諾創(chuàng)信專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32258
• 代理人: 王美華

1.一種檢測酶活性及化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物性能的方法，其特征在于，包括發(fā)光杯、化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A、化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B、與所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A、化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B相配合檢測的酶溶液、感光設(shè)備；所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A、化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B與所述酶溶液發(fā)光體系的建立；

所述檢測酶溶液活性或者所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物的性能包括以下步驟：

1)將所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A和化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B按一定比例調(diào)制混合均勻，并置于所述發(fā)光杯中，備用；

2)將所述酶溶液稀釋至一定的濃度；

3)將步驟2)所述稀釋過的酶溶液置于所述發(fā)光杯中與所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A和化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B的混合液充分混合，并置入所述感光設(shè)備中進行光信號強度的測定，得出光信號強度X；

4)計算所述酶溶液的活性或者所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物的性能；

其中，所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A和化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B為能夠直接與所述酶溶液產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的任一種化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物，包括魯米諾-雙氧水反應(yīng)底物、磷酸或磷酸酯類的反應(yīng)底物、含釕的化學(xué)反應(yīng)底物；所述酶溶液為能夠直接與所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A和化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B進行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)并產(chǎn)生光信號的酶，包括過氧化氫酶、辣根過氧化氫酶或堿性磷酸酶；

其中，所述化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物A為魯米諾發(fā)光液A液，所述化學(xué)反應(yīng)發(fā)光底物B為魯米諾發(fā)光液B液；所述魯米諾發(fā)光液A液包括魯米諾和Tris-緩沖液成分，所述魯米諾發(fā)光液B液包括過氧化物成分；所述魯米諾發(fā)光液A液和所述魯米諾發(fā)光液B液按照1:1的比例調(diào)制混合；

其中，以參照酶試劑的活性為100，對待測酶試劑的活性進行測定和評價，按照下式計算待測酶試劑的酶活性:

酶活性＝100× 待測酶的信號強度/參照酶的信號強度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測酶活性及化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物性能的方法，其特征在于，所述發(fā)光杯的材料為對可見光無吸收的塑料。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測酶活性及化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物性能的方法，其特征在于，所述發(fā)光杯的內(nèi)腔為長方體形，所述發(fā)光杯的壁厚均勻。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測酶活性及化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物性能的方法，其特征在于，所述的感光設(shè)備為能夠測定光信號強度的設(shè)備，包括照相機、光電池、光電倍增管、化學(xué)發(fā)光測定設(shè)備。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測酶活性及化學(xué)發(fā)光反應(yīng)底物性能的方法，其特征在于，所述的感光設(shè)備為CR-0302型光信號閱讀儀。