[發(fā)明專利]桃砧木中桃抗砧1號的組培繁殖技術(shù)

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510653264.1
• 申請日: 2015-10-12
• 公開（公告）號: CN105210870A
• 公開（公告）日: 2016-01-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王新衛(wèi);白曉燕;王力榮;朱更瑞;方偉超;曹珂;陳昌文;郝峰鴿
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到桃砧木中桃抗砧1號的組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)。

背景技術(shù)

我國桃栽培歷史悠久，是世界第一桃生產(chǎn)國，但在桃苗生產(chǎn)上普遍采用野生桃或半野生桃種子的實生苗作為砧木，培育的桃砧木品種很少。用實生苗作砧木，其一致性差、抗性分散，不利于果園的標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)和一致性果實品質(zhì)控制。

砧木品種化是果樹砧木發(fā)展的重要方向，目前國外桃砧木品種化已取得了重要進(jìn)展。通過有性雜交聚合親本優(yōu)良性狀是獲得嫁接親和性良好、抗性強(qiáng)砧木的有效途徑。然而，利用雜交獲得的砧木品種的種子進(jìn)行實生繁殖時，其優(yōu)良性狀往往會發(fā)生分離，產(chǎn)生不具有砧木優(yōu)良性狀的后代，在生產(chǎn)上利用時，不能進(jìn)行一致性砧木的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。采用扦插、組織培養(yǎng)等無性繁殖技術(shù)獲得砧木的無性系材料，可以很好地解決種子實生繁殖產(chǎn)生的優(yōu)良性狀分離、砧木一致性差等問題。有無配套的無性繁殖技術(shù)是限制無性系砧木大量生產(chǎn)與應(yīng)用的瓶頸。國外無性系砧木GFF677等的普遍應(yīng)用，其配套的無性繁殖技術(shù)功不可沒，GFF677已開發(fā)出成功的組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)，能夠在短時間內(nèi)獲得大量無性系苗木。然而，在借鑒不同桃組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)時，材料的基因型差異使得不同基因型的桃砧木要求不同的培養(yǎng)基配方、植物生長調(diào)節(jié)劑比例和生根條件等。

中桃抗砧1號為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所培育的抗再植障礙桃砧木新品系，對重茬地具有良好的適應(yīng)能力。中桃抗砧1號的生產(chǎn)應(yīng)用有望為我國廣大桃產(chǎn)區(qū)持續(xù)穩(wěn)定的桃果生產(chǎn)提供良好砧木。然而，該砧木通過種子繁殖存在一定比例的抗性分離和株型分離，其無性繁殖技術(shù)取得突破將是其推廣應(yīng)用的關(guān)鍵。目前，除我們開展的研究外，還沒有中桃抗砧1號組織培養(yǎng)繁殖無性系苗木的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明公開了桃砧木中桃抗砧1號的組培繁殖技術(shù)，用于中桃抗砧1號的無性系苗木繁殖。該技術(shù)針對性強(qiáng)，外植體初代誘導(dǎo)萌芽率達(dá)80%以上，增殖培養(yǎng)增殖系數(shù)可達(dá)2-5，伸長培養(yǎng)壯苗后生根率可達(dá)80%以上，煉苗移栽成活率90%左右。該技術(shù)可在實驗室條件下獲得大量中桃抗砧1號無性系苗木，為生產(chǎn)上提供基因型一致的桃抗性砧木。本發(fā)明實現(xiàn)上述目的采用以下技術(shù)方案：

中桃抗砧1號的組培繁殖技術(shù)，它包括以下步驟：

1）外植體的采集與預(yù)處理

在桃枝條旺盛生長期，挑選生長旺盛、健康無病蟲害10cm長左右的新梢，去除葉子和頂芽，留下0.2-0.3cm長的葉柄，然后用含有洗潔精的自來水清洗枝條表面的灰塵后，將其剪成含有2個嫩芽的小段；在二溴海因溶液中浸泡20min，然后用流水沖洗1-2h，用于初代培養(yǎng)。

2）無菌苗的建立

在超凈工作臺上，將20個左右的莖段放入500mL的燒杯中，首先加入75%乙醇淹沒實驗材料，緩慢搖晃30s，迅速將乙醇倒出；然后加入0.1%升汞溶液攪拌4min，最后用無菌水沖洗3次，浸泡1次，浸泡時間為5-10min。將材料放在盛有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，吸干材料表面水分，用無菌手術(shù)刀分別切去莖段的基部和頂部0.2cm，然后每個莖段接種在含有初代培養(yǎng)基的試管中進(jìn)行接種培養(yǎng)。

3）增殖培養(yǎng)

組培材料在增殖培養(yǎng)基Ⅰ上增殖2代，再在增殖培養(yǎng)基Ⅱ上增殖1代，隨后再轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基Ⅰ，如此循環(huán)往復(fù)，直到得到所需數(shù)量的無根苗。

4）伸長培養(yǎng)

用手術(shù)刀片將經(jīng)過增殖培養(yǎng)的叢生芽基部切一個新切口，轉(zhuǎn)入伸長培養(yǎng)基培養(yǎng)。當(dāng)這些叢生芽繼續(xù)生長到長度為1.5cm左右時，從主干枝條上切下，接種在伸長培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)3周左右。伸長培養(yǎng)階段長度低于1.5cm的小芽亦可以轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行循環(huán)培養(yǎng)。

5）生根階段

將經(jīng)過伸長培養(yǎng)的無根組培苗基部切一個新切口，剪去基部側(cè)芽和葉片，接種到盛有生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，每個培養(yǎng)瓶中放置3-4個待生根苗。先將培養(yǎng)瓶放在組培間內(nèi)黑暗條件下培養(yǎng)5-7天，再放到組培室的散射光下培養(yǎng)2天，最后回歸到正常組培苗培育的光、溫條件培養(yǎng)2-3周，待根長出后用于煉苗移栽。

6）溫室煉苗移栽

待組培苗生根2-4條，根長1-4cm時，進(jìn)行組培苗煉苗5-7天，在下午16:00-18:00移栽到裝有珍珠巖與腐植土1:1混配的濕潤基質(zhì)的育苗盒中，澆透水，蓋上透明保濕罩，上留1個風(fēng)口，置于濕度60-70%的溫室內(nèi)讓其生長成苗。移栽后不定期進(jìn)行噴水和噴灑殺菌劑殺菌等。