[發明專利]一種低損傷的結直腸癌細胞原代培養方法有效
| 申請號： | 201510647527.8 | 申請日： | 2015-10-09 |
| 公開（公告）號： | CN105154405B | 公開（公告）日： | 2019-04-05 |
| 發明（設計）人： | 趙增仁;翟從劼;張峰;姜霞;唐宇杰 | 申請（專利權）人： | 河北醫科大學第一醫院 |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100 | 代理人： | 董金國;李志民 |
| 地址： | 050031 河*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 損傷 直腸 癌細胞 培養 方法 | ||
1.一種低損傷的結直腸癌細胞原代培養方法，其特征在于，其包括如下步驟：
（1）組織前處理：將結直腸癌組織經抗生素處理，同時經白介素6抑制劑浸泡處理；
（2）切塊；
（3）培養：先進行無培養基培養，純血清潤洗培養瓶，組織塊直接放置到培養瓶中，組織培養起始的3h，不添加培養基，3h過后，待組織塊粘到培養瓶上，再添加1mL純血清進行培養，純血清培養24h；然后放入含抗生素的培養基中進行初期培養和正常培養，至細胞貼壁；
步驟（3）所述初級培養采用初級培養基，初級培養基為含有體積分數為10%胎牛血清、4種低濃度抗生素和2mmol/L谷氨酰胺的RPMI-1640培養基，其中4種低濃度抗生素為100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 鏈霉素、0.25 μg/mL 兩性霉素B、80 μg/mL 慶大霉素；
步驟（3）所述正常培養采用正常培養基，正常培養基為含有體積分數為10%胎牛血清、3種抗生素和2 mmol/L谷氨酰胺的RPMI-1640培養基，其中3種抗生素為100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 鏈霉素、0.25 μg/mL 兩性霉素 B。
2.根據權利要求1所述的低損傷的結直腸癌細胞原代培養方法，其特征在于，步驟（1）將結直腸癌組織以無菌生理鹽水沖洗，然后放入含抗生素的無血清培養基浸泡。
3.根據權利要求2所述的低損傷的結直腸癌細胞原代培養方法，其特征在于，所述含抗生素的無血清培養基中抗生素為：500 U/mL 青霉素，500 μg/mL 鏈霉素，1.25 μg/mL 兩性霉素B，80μg/mL 慶大霉素。
4.根據權利要求1所述的低損傷的結直腸癌細胞原代培養方法，其特征在于，步驟（2）切塊為：將組織塊放入細胞培養皿中，用無菌手術刀將組織切碎至體積15-30mm3。
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