[發明專利]一種檢測微生物的方法

有效

• 申請號: 201510632772.1
• 申請日: 2015-09-29
• 公開（公告）號: CN105203578B
• 公開（公告）日: 2018-03-09
• 發明（設計）人: 杜美紅;楊寅;代鳳英;張淼
• 申請（專利權）人: 北京市理化分析測試中心
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司11283
• 代理人: 嚴政,李婉婉

技術領域

本發明涉及食品安全檢測領域，具體地，涉及一種檢測微生物(特別是有害微生物)的方法。

背景技術

食品安全是重大民生問題。食源性微生物致病菌有效的監測對于首都食品質量控制和監管尤為重要。針對食品中的病原微生物(如細菌、真菌和病毒等)以及其他有害生物(如寄生蟲)，傳統的檢測方法為分離培養法。分離培養需要前增菌、增菌、生化鑒定或血清學鑒定，整個檢測過程需要2-3天甚至5-6天的時間才能完成，而且檢測過程中所需的培養基準備、平板培養、菌落計數、生化鑒定等使得檢測任務勞動強度大，耗時，不能及時、快速評價食品中微生物的安全性，不利于監管部門對問題食品的快速反應。傳統檢測病原微生物方法步驟多，所需時間長，速度慢，難以適應食品快速流通檢測的需要；現代微生物檢測方法雖然檢測速度快，但是在細菌濃度較低的情況下容易造成漏檢，靈敏度低。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種操作簡單、檢測時間短、靈敏度高的檢測微生物的方法。

本發明的發明人進行了大量的研究，發現配合使用免疫磁分離技術與核磁共振技術即可實現微生物的高靈敏度檢測。因此，為了實現上述目的，本發明提供了一種檢測微生物的方法，該方法包括以下步驟：

(1)將免疫磁球與液體形式的待測樣品進行混合，得到混合后的物料；混合的條件使得當待測樣品中存在微生物時，免疫磁球能夠特異性地結合所述微生物，所述能夠特異地與微生物結合的免疫磁球由抗體與磁球偶聯得到；

(2)將所述混合后的物料置于分選磁場中進行磁分離，除去未結合在免疫磁球上的物質；

(3)重懸磁分離得到的沉淀物，并將得到的重懸液進行核磁共振而檢測橫向弛豫時間，根據橫向弛豫時間判斷待測樣品中的微生物的含量。

通過上述技術方案，本發明能夠快速有效地檢測樣品中微生物(特別是細菌、真菌或病毒等)的含量，操作簡單易行且特異性強、靈敏度高，在痕量微生物檢測領域極具應用前景。

本發明的其它特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。

附圖說明

附圖是用來提供對本發明的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與下面的具體實施方式一起用于解釋本發明，但并不構成對本發明的限制。在附圖中：

圖1是按照本發明的一種實施方式測得的微生物的含量與△T₂值之間的關系圖；

圖2是按照本發明的另一種實施方式測得的微生物的含量與△T₂值之間的關系圖；

圖3是按照本發明的另一種實施方式測得的微生物的含量與△T₂值之間的關系圖。

具體實施方式

以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。

在本發明中，在未作相反說明的情況下，使用的單位“CFU/mL”意指以每毫升待測樣品為基準的菌株的CFU數；使用的術語“免疫磁球”是指通過偶聯反應將抗體結合到磁性微球(或磁球)的表面上，形成的免疫磁性微球；術語“橫向弛豫時間”是指兩個處在一定距離內，進動頻率相同、進動取向不同的核互相作用，交換能量，改變進動方向所需的時間稱為橫向弛豫時間(或自旋-自旋弛豫時間，T₂)；本發明中使用的液體體積均為20℃下的數值；涉及的術語“室溫”指室內溫度，通常為5-40℃。

本發明提供的檢測微生物的方法包括以下步驟：

(1)將免疫磁球與液體形式的待測樣品進行混合，得到混合后的物料；混合的條件使得當待測樣品中存在微生物時，免疫磁球能夠特異性地結合所述微生物，能夠特異地與微生物結合的免疫磁球由抗體與磁球偶聯得到；

(2)將所述混合后的物料置于分選磁場中進行磁分離，除去未結合在免疫磁球上的物質；

(3)重懸磁分離得到的沉淀物，并將得到的重懸液進行核磁共振而檢測橫向弛豫時間，根據橫向弛豫時間判斷待測樣品中的微生物的含量。

本發明的檢測方法優選為體外檢測方法。

根據本發明，所述微生物可以為各種常見的微生物，特別是有害微生物(或致病菌)，如細菌、真菌或病毒。所述抗體可以根據微生物的具體種類進行選擇，只要能夠特異性地結合所述微生物從而實現免疫磁分離即可。優選情況下，所述微生物為沙門氏菌(Salmonella)，所述抗體為編號為01-91-99的KPL多克隆抗體。