[發(fā)明專(zhuān)利]一種口腔粘膜的良性病損排查與惡性病變檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510629159.4
• 申請(qǐng)日: 2015-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105181422A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李成章;陳漢正;杜格非
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N1/30
• 分類(lèi)號(hào): G01N1/30;G01N21/25;G01N21/64
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 程欣

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)裝置試劑盒，尤其涉及一種口腔粘膜的良性病損排查與惡性病變檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

口腔癌是指發(fā)生于口腔的惡性腫瘤，包括唇癌、牙齦癌，舌癌，軟硬腭癌、頜骨癌，口底癌、口咽癌、涎腺癌和上頜竇癌以及發(fā)生于顏面部皮膚粘膜的癌癥等，口腔癌是頭頸部較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一目前用于口腔癌和癌前病變的診斷技術(shù)有二類(lèi)：

1、創(chuàng)傷性技術(shù)：即組織病理方法，需切除患者病變組織，然后切片在顯微鏡下觀察組織病變情況。該方法直接，準(zhǔn)確，但因具創(chuàng)傷性，有促進(jìn)轉(zhuǎn)移的可能性，且口腔病損組織小，取樣和切片時(shí)可能因部位偏差出現(xiàn)假陰性，故此法不易為病人早期介紹，而影響早期診斷。

2、非創(chuàng)傷性技術(shù)：

脫落細(xì)胞檢查法：優(yōu)點(diǎn)為非創(chuàng)傷性技術(shù)，易被患者接受，但此法假陽(yáng)性結(jié)果可達(dá)37％。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)背景技術(shù)中存在的問(wèn)題提供了一種口腔粘膜的良性病損排查與惡性病變檢測(cè)試劑盒。

其具體技術(shù)方案如下：

一種口腔粘膜的良性病損排查與惡性病變檢測(cè)試劑盒，其特征在于：本試劑盒包括以下組分：

(1)預(yù)檢試劑：包括以下原料：摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液和以下質(zhì)量百分比濃度的原料：山梨酸鉀0.1～1％，牛血清白蛋白0.01～0.5％，余量為水；

(2)檢示試劑1:包括以下原料：摩爾濃度為0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液和以下質(zhì)量百分比濃度的原料：碳酸氫鈉1～5％、山梨酸鉀0.1～1％、牛血清白蛋白0.01～0.5％、孟加拉紅0.1％～5％、十二烷基硫酸鈉0.01～0.5％及5-氨基酮戊酸0.01～0.5％，余量為水；

(3)檢示試劑2：包括以下質(zhì)量百分比濃度的原料：碳酸氫鈉1～5％、山梨酸鉀0.1～1％，余量為水。

所述磷酸鹽緩沖液為0.01M，配制方法如下：

稱(chēng)7.9gNaCl，0.2gKCl，0.24gKH₂PO4和1.8gK₂HPO4，溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加去離子水定容至1L，保存于4℃冰箱中備用。

所述預(yù)檢試劑的配制方法為：在溫度為0～4℃條件下配制磷酸鹽緩沖液，再向配制完成的磷酸鹽緩沖液中依次加入山梨酸鉀、牛血清白蛋白，最后用去離子水定容，在搖床上充分混勻2～12小時(shí)即可。

所述檢示試劑1的配制方法為：在溫度為0～4℃條件下配制磷酸鹽緩沖液，再依次加入山梨酸鉀、碳酸氫鈉、牛血清白蛋白、孟加拉紅、十二烷基硫酸鈉及5-氨基酮戊酸，最后用去離子水定容，在搖床上充分混勻2～12小時(shí)即可。

所述檢示試劑2的配制方法為：先配制1～5％碳酸氫鈉溶液，再依次加入山梨酸鉀，最后用去離子水定容，在搖床上充分混勻2～12小時(shí)即可。

上述預(yù)檢試劑1和預(yù)檢試劑2中磷酸鹽緩沖液分別作為預(yù)檢試劑溶劑和檢示試劑溶劑，山梨酸鉀用于試劑防腐，十二烷基硫酸鈉用于增強(qiáng)試劑熒光效應(yīng)，5-氨基酮戊酸為光敏劑，用于增加試劑滲透性，牛血清白蛋白為酶穩(wěn)定劑，用于防止試劑成分被生物酶降解，碳酸氫鈉用于調(diào)節(jié)試劑溶液PH值。

本發(fā)明試劑盒需避光，且在-18攝氏度～室溫條件下保存。

本發(fā)明還提供一種利用上述試劑盒檢測(cè)口腔粘膜的良性病損與惡性病變的方法，步驟如下：

(1).口腔檢查，記錄病變的詳細(xì)情況；

(2).用潔凈水漱口，去除食物殘屑；

(3).取預(yù)檢試劑含漱1～5分鐘；

(4).用棉簽蘸取檢示試劑1涂擦于病變局部，染色2～10分鐘；

(5).取檢示試劑2含漱1～5分鐘；

(6).對(duì)比比色板或自體激發(fā)熒光檢測(cè)儀器進(jìn)行半定量或定量評(píng)價(jià)染色結(jié)果。

所述對(duì)比比色板上由淺至深設(shè)置有a、b、c、d四個(gè)色相，其制備方法如下：分別配置a1、b1、c1、d1四種溶液，然后a1、b1、c1、d1四種溶液中分別浸泡濾紙，待濾紙染色完全后，拿出晾干，置于同一載體上即得。

所述a1、b1、c1、d1四種溶液的成分與檢示試劑1的成分一致，其中a1中各溶質(zhì)的濃度為檢示試劑1的十分之一，b1中各溶質(zhì)的濃度為檢示試劑1的四分之一，c1中各溶質(zhì)的濃度為檢示試劑1的二分之一，d1中各溶質(zhì)的濃度為檢示試劑1的四分之三。

該試劑盒可用于口腔粘膜的良性病損與惡性病變的輔助鑒別診斷，輔助臨床醫(yī)師早期診斷口腔癌及監(jiān)測(cè)口腔癌前病變惡變。