[發明專利]一種HLA-B*1502檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201510628748.0
• 申請日: 2015-09-28
• 公開（公告）號: CN105296615A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 汪大為
• 申請（專利權）人: 北京晉祺生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京國昊天誠知識產權代理有限公司 11315
• 代理人: 劉昕

技術領域

本發明涉及卡馬西平個體化用藥檢測技術領域，尤其涉及一種HLA-B*1502檢測試劑盒。

背景技術

卡馬西平是常見的抗精神性藥物，臨床上主要用于抗癲癇，也可用于三叉神經痛等。在某些個體當中，卡馬西平會導致史蒂文斯-約翰遜綜合征(StevensJohnsonsyndrome，SJS)和中毒性表皮壞死溶解癥(toxicepidermalnecrolysis，TEN)，這是一種嚴重的皮膚和粘膜反應，可導致永久性殘疾甚至致命。在白種人中，由卡馬西平引起的SJS/TEN的幾率很低，只有萬分之一到萬分之三，然而，在一些亞洲國家，包括南亞的印度人，患者服用卡馬西平而導致的SJS/TEN較白種人高出10倍左右。

現已證實，SJS/TEN風險的增加與HLA-B*1502有關，并且這種關聯性與個體中HLA-B*1502純合還是雜合無關，HLA-B*1502等位基因幾乎僅存在于有亞裔血統的人群中。美國食品藥品監督管理局(FDA)建議，在開始使用卡馬西平治療之前，應對患者進行HLA-B*1502等位基因檢測，如經檢測結果呈陽性，則不宜使用卡馬西平，除非藥品的預期收益明顯大于嚴重皮膚反應風險的增加。

中國食品藥品監督管理局(CFDA)在2015年發布的《藥物代謝酶和藥物作用靶點基因檢測技術指南(試行)》中明確指出，“攜帶HLA-B*1502等位基因者慎用卡馬西平和苯妥英”。

目前對HLA-B*1502的檢測主要有直接測序法(PCR-SBT)、PCR-SSP法以及熒光定量法。直接測序法優點是直觀，可直接獲取待檢者的具體HLA類型，但是操作繁瑣，所需試劑和設備均被國外企業壟斷，價格不菲，并且由于需要經常性的開管，很容易造成樣本之間的交叉污染，因此不適宜大規模推廣；PCR-SSP法成本較低，操作簡單，可準確得鑒定待測樣本是否含有HLA-B*1502等位基因，然而它最終也需要開管檢測，進而增加樣本間污染的可能性，因此也不是檢測大量樣本的最理想方法；熒光定量法有很高的靈敏度，可快速準確得進行分型，但需要比較昂貴的設備和探針。因此，探討檢測HLA-B*1502的新方向、新方法、新技術很有必要。

研究發現，在HLA-B基因座附近存在與某些亞型高度連鎖的SNP，即“標簽SNP”，HLA-B*1502的標簽SNP是rs10484555的C等位基因，二者的特異性可達99.27％。因此，通過檢測標簽SNP來檢測樣本的HLA-B的基因型是一種新的研究方向。

環介導等溫擴增(Loop-mediatedIsothermalAmplification，LAMP)技術是日本科學家于2000年開發出來的一種恒溫擴增技術，針對靶基因的六個區域設計四條特異性引物，在鏈置換DNA聚合酶的作用下恒溫擴增，可在十幾分鐘到一小時之內產生10⁹-10¹⁰數量級的產物，反應結束后通過肉眼直接觀察體系狀態的改變來判定待測樣本的基因型，無需開管，因此大大簡化了操作步驟，同時又可以有效避免樣本交叉污染，而且，僅需普通水浴鍋即可開展檢測，又節約了大量的檢測成本。因此，采用LAMP方法檢測HLA-B*1502的基因型是一種新型且適于大規模使用的方法。

發明內容

本發明要解決的問題是現有的HLA-B*1502檢測方法不理想，不適于大規模推廣使用。

為解決上述問題，本發明在LAMP的基礎上采用等位基因特異性環介導等溫擴增(Allele-SpecificLAMP)技術，針對HLA-B*1502的標簽SNP進行檢測，提供了一種適于推廣使用的試劑盒及檢測方法。

本發明的第一個目的在于提供一種HLA-B*1502檢測引物，用于檢測rs10484555的C等位基因，包括以下引物：

5′-AAATTGTTAAAGGTACTTGGAAAG-3′(SEQIDNo.1，以下簡稱F3)

5′-CATCTAAAGTATACAATTCAATGGTT-3′(SEQIDNo.2，以下簡稱B3)

5′-GCCATGAAGTAAATCCATAAATTTTGAGTTTGTGCCTGTCAAGCTAGGA-3′(SEQIDNo.3，以下簡稱FIP)

5′-AGAGAGACATATTATAAAGCCGTGGATCATATTCAGAGTTTTAAATCTGCA-3′(SEQIDNo.4，以下簡稱BIP)。