[發明專利]一種鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測引物及其組合物

在審

• 申請號: 201510628746.1
• 申請日: 2015-09-28
• 公開（公告）號: CN105296614A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發明（設計）人: 汪大為
• 申請（專利權）人: 北京晉祺生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京國昊天誠知識產權代理有限公司 11315
• 代理人: 劉昕

1.一種鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測引物，其特征在于：包括以下引物：

5′-GTCGACTGTTGCTTACACTTTC-3′(SEQIDNo.1，以下簡稱F3)

5′-GCCCAGTTTCCATTTGCCT-3′(SEQIDNo.2，以下簡稱B3)

5′-TCTGGAGTCAGATGCACCATTCTGACATAACAGTGTTCACTAGC-3′(SEQIDNo.3，以下簡稱FIPA)

5′-ACTGGAGTCAGATGCACCATTCTGACATAACAGTGTTCACTAGC-3′(SEQIDNo.4，以下簡稱FIPT)

5′-TGAACGTGGATGCAGTTGGTGGGAGCCTCTCTTATAACCTTGATACC-3′(SEQIDNo.5，以下簡稱BIP)。

2.一種鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，包括權利要求1中所述的引物，其特征在于：還包括dNTP、緩沖液、Bst聚合酶和超純水。

3.根據權利要求2所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：所述組合物分為兩個體系，分別記為體系A和體系T；

體系A中包括F3、B3、FIPA、BIP、dNTP、緩沖液、Bst聚合酶和超純水；

體系T中包括F3、B3、FIPT、BIP、dNTP、緩沖液、Bst聚合酶和超純水。

4.根據權利要求3所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：兩個體系中均還包括用于顯示體系顏色的指示劑。

5.根據權利要求4所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：所述指示劑為鈣黃綠素和氯化錳的組合物或者為羥基萘酚藍。

6.根據權利要求5所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：指示劑在體系A和體系T中的濃度相同；

若指示劑為鈣黃綠素和氯化錳的組合物，鈣黃綠素為25μM，氯化錳為0.5mM；

若指示劑為羥基萘酚藍，其為120μM。

7.根據權利要求3所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：所述兩個體系中均還包括添加劑，所述添加劑在兩體系中的濃度一致；

所述添加劑為甜菜堿或二甲基亞砜中的一種；若添加劑為甜菜堿，其濃度大于0，小于等于1M；若為二甲基亞砜，其濃度為大于0，小于等于10％(體積分數)。

8.根據權利要求7所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：所述甜菜堿的濃度為0.8M。

9.根據權利要求3-8任一所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：所述兩個體系中：F3的濃度相同，為0.4μM；B3的濃度相同，為0.4μM；BIP的濃度相同，為1.6μM；體系A中FIPA的濃度和體系T中FIPT的濃度相同，均為1.6μM。

10.根據權利要求3-8任一所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：所述兩個體系中緩沖液的濃度相同，其包括：Tris-HCl20mM，KCl50mM，(NH4)₂SO₄10mM，MgSO₄4mM，Tween-200.1％(體積分數)。

11.根據權利要求3-8任一所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：兩個體系中dNTP的濃度相同，均為1.4mM；兩個體系中Bst聚合酶均為8U。

12.一種鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測方法，使用權利要求3-11任一所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測組合物，其特征在于：將待檢測的核酸分別加入到體系A和體系T中，得到的兩個反應體系于55～70℃下反應，反應結束后觀察體系的變化。

13.根據權利要求12所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測方法，其特征在于：所述待檢測的核酸在兩個體系中的濃度一致，均為0.8～4ng/μL。

14.根據權利要求12或13所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測方法，其特征在于：反應結束后，將兩個體系分別進行滅活處理。

15.根據權利要求12或13所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測方法，其特征在于：反應溫度為60℃。

16.根據權利要求12或13所述的鐮刀形細胞性貧血癥的基因檢測方法，其特征在于：所述反應時間為40～120min。