[發明專利]用于環境真菌生物多樣性高通量測序的復合標簽及其應用在審
| 申請號： | 201510628184.0 | 申請日： | 2015-09-28 |
| 公開（公告）號： | CN105331684A | 公開（公告）日： | 2016-02-17 |
| 發明（設計）人： | 高其康;李梅;樓兵干 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 黃平英 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 環境 真菌 生物多樣性 通量 復合 標簽 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種用于環境真菌生物多樣性高通量測序的復合標簽，其特征在于，其堿基序列如如下序列編號NO.1～NO.48所示：
2.一種利用權利要求1所述復合標簽進行超高通量基因測序的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)提取每一個樣本的總DNA；
(2)對每一個樣本，從權利要求1中所示48對且未被選擇過的序列中選擇任一一對序列作為引物，對對應樣本的總DNA進行擴增；
(3)對每一個樣本的擴增產物進行電泳檢測，對擴增產物進行純化回收；
(4)對每個樣本純化回收后的產物紫外分光光度計精確定量；
(5)將所有樣本等量混合后建立一個測序文庫；
(6)對所建測序文庫進行高通量測序。
3.根據權利要求2所述方法，其特征在于，所述樣本為含有真菌的樣本。
4.根據權利要求2所述方法，其特征在于，對對應樣本的總DNA進行擴增的PCR擴增體系為：
50ng樣本總DNA，4μLMg2+，5μL10×Buffer，4μL濃度為5nmoldNTP，1.5UTaq酶，濃度為10pmol引物各1.5μL，補水至50μL。
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