[發明專利]一種昆蟲細胞表達抗菌肽Cecropin DC1的方法

有效

• 申請號: 201510616121.3
• 申請日: 2015-09-24
• 公開（公告）號: CN105200084A
• 公開（公告）日: 2015-12-30
• 發明（設計）人: 黃自然;陳松彬;倪彥燕
• 申請（專利權）人: 廣州市科瑋生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C07K14/435;C12N15/12
• 代理公司: 廣州市深研專利事務所 44229
• 代理人: 陳雅平

1.一種昆蟲細胞表達抗菌肽CecropinDC1的方法，其特征在于：通過點突變技術，將抗菌肽DC的第38位賴氨酸的密碼子AAG改為天冬酰胺的密碼子AAC。

2.權利要求1所述的昆蟲細胞表達的CecropinDC1，其氨基酸序列為SEQIDNO：2所示。

3.權利要求1所述的昆蟲細胞表達的CecropinDC1，其核苷酸序列為SEQIDNO：1所示。

4.一種昆蟲細胞表達抗菌肽CecropinDC1的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）構建包含SEQIDNO：1所示核苷酸序列的重組桿狀病毒轉移載體；

2）將構建好的重組轉移載體與苜蓿銀蚊夜蛾多核型多角體病毒AcNPV-DNA共轉染Sf21昆蟲細胞，按以下方式獲得表達抗菌肽Cecropin的重組病毒：

在1.5ml滅菌的Eppendorf管中加入2μg重組轉移載體DNA、10μgAcNPV-DNA及0.8ml共轉染緩沖液，將該混合物在室溫下孵育30min后共轉染對數期的Sf21昆蟲細胞；然后將共轉染后的Sf21細胞先用無血清培養基Sf-900IISFM培養基清洗兩次，再用含有10%FBS的完全培養基在27℃下培養4~6d，收集培養基上清作為病毒原液用來篩選重組病毒，重組病毒經過空斑篩選，獲得病毒溶液，該病毒溶液命名為含有抗菌肽CecropinDC1基因的重組病毒；

3）重組病毒感染生長旺盛的Sf21細胞，27℃培養4~6d進行感染表達，之后通過離心收集培養液。