[發(fā)明專利]一種獸用疫苗的免疫佐劑、制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510612310.3
• 申請(qǐng)日: 2015-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105106950B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱瑞良;魏凱;胡莉萍;鐘世勛;彭軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K39/39
• 分類號(hào): A61K39/39
• 代理公司: 濟(jì)南智圓行方專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37231
• 代理人: 卜愛(ài)華

1.一種獸用疫苗的免疫佐劑，其特征在于，所述免疫佐劑由下列原料以質(zhì)量份組成：泰山松花粉多糖17份、蜂膠8份、蘆薈多糖6份、覆盆子多糖13份、老君須多糖5份、打碗花多糖7份、親水性表面活性劑3份、高分子膠束物質(zhì)5份和水70份；

其中，所述親水性表面活性劑為司班80和普魯尼克121的混合物；所述司班80和普魯尼克121的質(zhì)量份數(shù)比為司班80為1.5份、普魯尼克121為2份；

其中，所述高分子膠束物質(zhì)為殼聚糖和卡波姆971P的混合物；所述殼聚糖和卡波姆971P的質(zhì)量份數(shù)比為殼聚糖為2.5份、卡波姆971P為1.2份；

所述獸用疫苗的免疫佐劑的制備方法，包括以下步驟：按配方量分別稱取各組分混合，冰水浴2h后混合均勻，用膠體磨機(jī)械乳化，得到免疫佐劑，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

其中，所述泰山松花粉多糖的提取方法為：將破壁后的泰山松花粉用索氏提取器在49℃抽提脂肪2h后得產(chǎn)物1，產(chǎn)物1加入占產(chǎn)物1質(zhì)量0.3%的胃蛋白酶在50℃反應(yīng)2h除蛋白后，用90℃熱水浸提9h，隨后降溫至4℃沉淀10h，然后取上清液一以10000 r/min過(guò)濾離心10min，在200 r/min和 60℃條件下減壓濃縮，得濃縮液；取Sevage試劑和濃縮液按質(zhì)量比為1:3混合均勻后放置3h后，取上清液二；再將上清液二與Sevage試劑按質(zhì)量比3:1混合均勻，靜置2h后, 取上清液三，然后將上清液三用無(wú)水乙醇沉淀8h后，將沉淀物在零下17℃冷凍干燥得到松花粉多糖；

其中，所述覆盆子多糖的制備方法包括以下步驟：取覆盆子洗凈干燥后將果肉粉碎制得覆盆子干粉，加入質(zhì)量為覆盆子干粉質(zhì)量8倍的石油醚和醇濃度為95％的乙醇混合物浸泡并超聲處理35 min，過(guò)濾后，得殘?jiān)唬挥孟鄬?duì)于殘?jiān)毁|(zhì)量12倍的醇濃度95%的乙醇浸泡，加熱回流1h后提取，過(guò)濾，得第一過(guò)濾液和殘?jiān)粴堅(jiān)屑尤胂鄬?duì)于殘?jiān)|(zhì)量13倍的去離子水后，加入復(fù)合酶A于35℃、pH6下酶解6h，酶解結(jié)束后滅酶得到提取液；將第一過(guò)濾液和提取液混合后在真空度0.07Mpa下減壓濃縮至55℃時(shí)相對(duì)密度為1.05的膏體，向膏體中加入相對(duì)于膏體質(zhì)量7倍的醇濃度為95%的無(wú)水乙醇，沉淀8h，高速離心后真空干燥得覆盆子多糖；所述復(fù)合酶A為酸性木聚糖酶和β-葡聚糖酶組成的復(fù)合酶，酸性木聚糖酶質(zhì)量用量為覆盆子干粉質(zhì)量的2.0％、β-葡聚糖酶質(zhì)量用量為覆盆子干粉質(zhì)量的4.5％；所述石油醚和醇濃度95％的乙醇體積比為1:5；

其中，所述蘆薈多糖的制備方法包括以下步驟：取2年蘆薈鮮葉洗凈，在去離子水中浸泡30min，以除去表皮滲出的黃色液汁,然后切去表皮，將內(nèi)層凝膠剪碎，用勻漿機(jī)勻漿后取上清液在 4℃冷藏9h得到蘆薈汁;將蘆薈汁與去離子水按質(zhì)量比1:13比例混合，加入復(fù)合酶B在35℃、PH6.2下酶解6h, 酶解結(jié)束后滅酶得提取液，將提取液在真空度0.08Mpa下減壓濃縮至55℃時(shí)相對(duì)密度為1.06的膏體，向膏體中加入相對(duì)于膏體質(zhì)量6倍的醇濃度為95%的無(wú)水乙醇，沉淀8h，高速離心得蘆薈多糖沉淀；再用Sevage試劑和蘆薈多糖沉淀質(zhì)量比為1:3混合均勻靜置2h，然后取上清液真空干燥得蘆薈多糖；所述復(fù)合酶B為酸性木聚糖酶和β-葡聚糖酶組成的復(fù)合酶，酸性木聚糖酶質(zhì)量用量為蘆薈汁質(zhì)量的3.0％、β-葡聚糖酶質(zhì)量用量為蘆薈汁質(zhì)量的2.5％；

其中，所述老君須多糖的制備方法包括以下步驟：取老君須洗凈干燥后，粉碎制得老君須干粉 ，老君須干粉與去離子水按1:18混合，85℃浸提8h，減壓濃縮后離心3次，每次離心的轉(zhuǎn)速為12000r/m，每次離心的時(shí)間為12min，每次離心的溫度為15℃，以除盡雜質(zhì)；隨后在真空度0.07Mpa下減壓濃縮至55℃時(shí)相對(duì)密度為1.08的膏體，向膏體中加入相對(duì)于膏體質(zhì)量6倍的醇濃度為95%的乙醇，沉淀8h，高速離心得老君須多糖沉淀；再用Sevage試劑和老君須多糖沉淀質(zhì)量比為1:3混合均勻，靜置1h后取上清液真空干燥得老君須多糖；

其中，所述打碗花多糖的制備方法包括以下步驟：取打碗花洗凈干燥后，粉碎制得打碗花干粉 ，打碗花干粉與去離子水按1:20混合，90℃浸提8h，減壓濃縮后離心3次，離心工藝參數(shù)為11000r/min、15min和20℃，以除盡雜質(zhì)；隨后在真空度0.06Mpa下減壓濃縮至65℃時(shí)相對(duì)密度為1.12的膏體，向膏體中加入相對(duì)于膏體質(zhì)量9倍的醇濃度為95%的無(wú)水乙醇，沉淀8h，高速離心得打碗花多糖沉淀；再用Sevage試劑和打碗花多糖沉淀質(zhì)量比為1:3混合均勻，靜置2h后取上清液真空干燥得打碗花多糖；

所述蜂膠，購(gòu)自泰安市蜂場(chǎng)；將蜂膠置于清潔的塑料膜袋中，用錘子敲碎，加入無(wú)水乙醇溶劑加熱至60°C攪拌至溶解完全，溶解比例為蜂膠：無(wú)水乙醇Ikg:10L，后冷卻至室溫，靜置，定容；用NN- 二甲基乙酰胺調(diào)節(jié)至pH值為7.0得蜂膠提取物溶液；將蜂膠提取物溶液經(jīng)0.8mm濾膜抽濾后分裝。